第三讲荧光分光光度法.ppt

?3.6 荧光分析的用途 分子荧光分析，是测量试样溶液在光源辐射激发下产生的荧光光谱及荧光强度，从而鉴别待测物质和测定其含量的一种分子光谱分析方法，它实际上是一种利用光能激发的分子发射光谱分析。它在实际应用中主要用于微量物质的定量分析。 荧光法作为一种高灵敏度的分析手段，被 广泛地应用于各个领域。可用荧光法测定的 元素达70多种，可用荧光法测定的有机化合 物为数更多，至少在数百种以上。 1. 无机化合物的荧光分析 能发生分子荧光的无机物很少，因此一 些无机元素需与某些有机试剂生成荧光络合 物后进行间接测定。 较常采用荧光法测定的元素有Be、Al、 B、Ga、Se、Mg及某些稀土元素。可测量约 60多种元素，测定的方法可以分为以下四种： （1）荧光熄灭法 一些元素可用荧光熄灭法进行测定，这 些元素的离子从发生荧光的其它金属-有机试 剂络合物中夺取该有机试剂或金属离子以组 成更稳定的络合物或难溶化合物，从而导致 荧光强度的降低，由荧光强度降低的程度来 测定该元素的含量。 用该法测定的元素有：F、Cl、S、Fe、 Ag、Co和Ni等。 （2）催化荧光法 某些荧光反应进行非常缓慢，荧光微弱 ，难于测定，但若有微量金属离子存在，可 起催化作用，反应将大大加速，可由在给定 时间内所测定的荧光强度来定量该起催化作 用的金属离子，称为催化荧光法。 用该法测定的元素有Cu、Be、Fe、Co、 Os及H2O2等，该方法灵敏度特高，有的可达 0.1ng·g-1。 （3）低温荧光法 测定的元素有Cr、Nb、U、Te等（-196?C 液氮温度下）。 （4）固体荧光法 测定的元素有U、Ce、Sm、Eu、Tb等稀 土元素及Sb、V等。 例如：测定杨梅黄素中痕量锗的新方法。锗与杨梅黄素在磷酸介质中形成配合物，此配合物在乙醇溶液中具有较强的荧光强度，λEx=446nm，λEm=506nm。 2. 有机化合物的荧光分析 在有机化合物中，脂肪族化合物的分子 结构较简单，能产生荧光的为数不多。芳香 族化合物因有共轭的不饱和体系，容易吸收 光能，其中结构庞大而复杂的化合物，在光 照射下大多能产生荧光。并且采用某些有机 试剂与弱荧光的芳香族化合物作用，可得到 很强的荧光物质。 因此对于胺类、甾体内、抗菌素、维生 素、氨基酸、蛋白质和酶等许多具有荧光性 质的物质都可进行分子荧光分析。 尤其适于生物体组分的分析。由于分子 荧光法具有很高的灵敏度和选择性，因此有 可能在生物组织中不经分离而直接测定。它 还用于酶的动力学和机理研究。 3. 其它用途 （1）机械工业：利用荧光法进行金属制品 的荧光探伤。 （2）农业：荧光法常被用于检查农副产品 的纯度、鉴定种子的生活力、及早发现农副 产品的败坏，判断果实成熟的程度以及诊断 农作物的病虫害等。 （3）石油化学探矿：利用荧光法测定钻探 水样、岩石样、土样中石油裂解产物的荧光 信息，从而辅助判断地层中贮油信息。 此外，在环境样品、半导体材料和食品 添加剂等试样中某些超痕量元素的分析中也 可以一显身手。 ?3.7 磷光分析 与荧光一样，任何发射磷光的物质也都 具有两个特征光谱，即：磷光的激发光谱和 磷光光谱。但荧光与磷光的发光机理、激发 态寿命及发光环境不同。 1. 磷光的产生 磷光是三重激发态的最低振动能级到单 重基态各振动能级跃迁所产生的辐射。 2. 磷光的特点 ? 磷光波长比荧光的长（T1S1）； ? 磷光寿命比荧光的长； ? 磷光寿命和强度对重原子和氧敏感。 3. 磷光的测定 磷光同浓度之间的关系与荧光相似： IP=2.303 ?P?lcI0 其中：IP为磷光强度， ?P为磷光效率。 当激发光强度、试样池厚度一定时： IP= K’c 与荧光一样，只有当浓度很小时，才符 合上式关系；但磷光的线性范围要比荧光大 一些。 （1）低温磷光（液氮） 由于磷光寿命长，T1的非辐射跃迁（内 转换）几率增加，碰撞失活（振动弛豫）的 几率、光化学反应几率都增加，从而降低磷 光强度。因此有必要在低温下测量磷光。 同时要求溶剂： ?易提纯且在分析波 长区无强吸收和发射；? 低温下形成具足 够粘度的透明的刚性玻璃体。 常用的溶剂： ? EPA混合溶剂—乙醇+异戊烷+二乙醚 （2+5+5） ? IEPA混合溶剂—CH3I+EPA（1+10）。 （2）室温磷