肌球蛋白轻链激酶抑制剂对急性肺损伤保护作用.PDFVIP

CritCare 2009，V01．21，No．4 中国危重病急救医学2009年4月第21卷第4期ChinMed，April ·215· ·论著· 肌球蛋白轻链激酶抑制剂对急性肺损伤的保护作用 白建文 邓伟吾 章剑 许淑敏 张斗霞 【摘要】 目的探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂ML一7对细菌脂多糖(LPS)诱导的人肺动脉内 皮细胞(HPAEC)和急性肺损伤(ALI)的影响。方法体外培养HPAEC，待4～6代予ML一7(10 tlmol／L)孵育 60min后，再给予LPS刺激60min，四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HPAEC活性；荧光显微镜下观察磷 酸化肌球蛋白轻链激酶(p—MLCK)免疫反应细胞。20只雌性BALB／e小鼠随机分组，LPS组鼻内注入LPS (1／tg／g))ML一7组在LPS滴鼻前进行ML-7干预。观察小鼠肺湿／于重(W／D)比值、支气管肺泡灌洗液 (BALF)蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性和病理学改变，用免疫组化法检测肺组织MLCK和 CDllb阳性免疫反应细胞，逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)检测肺组织MLCKmRNA表达，蛋白质免疫印 迹法(Western blotting)检测肺组织MLCK蛋白表达。结果与LPS组比较，HPAEC在ML一7孵育下吸光度 蛋白含量均明显降低(PO．05或P0．01)。病理结果显示，LPS组小鼠肺部炎症反应明显，以中性粒细胞浸 润为主，肺泡充血、水肿)ML一7组肺部炎症及充血明显改善。免疫组化显示位于内皮的MLCK免疫反应细胞 和位于炎性细胞的CDllb在ML一7组均较LPS组明显减少。ML一7组肺组织MLCK的mRNA和蛋白表达均 mRNA的表 P—MLCK表达；减轻LPS诱导的中性粒细胞在肺内浸润、肺水肿及MLCK、CDllb蛋白和MLCK 达。表明抑制MLCK活性可能通过减弱MLCK磷酸化而达到稳定血管屏障功能，防治ALI的作用。 【关键词】肌球蛋白轻链激酶抑制剂； 肌球蛋白轻链激酶； 急性肺损伤 effectof kinaseinhibitoronacute BAI Protective myosinlight—chain lunginjuryJian—zoen’。DEN乙Wei- Shu—min，ZHANG andIntensiveCritical 妣，ZHANG．Iian，XU of Dou—xia．’DepartmentEmergency to Affiliated 200120，China Medicine，DongfangHospital TongjiUniversity，Shanghai the To influenceofinhibitorof kinase(MLCK) [Abstract]Objectiveinvestigate myosinlight-chain onthehuman arterialendothelial with pulmonary cell(HPAEC)challengedlipopolysaccharide(LPS)and LPSinducedofacute mice．MethodsHPAECswereculturedinECMmediumandits