人类心脏发育候选基因hole和DAND5的克隆与功能研究.pdfVIP

摘 要 心脏是脊椎动物器官发生过程中最早形成的结构之～。心脏发育 是一个复杂的过程，受一系列基因的精确调控。研究发现，某些基因 在时空上的表达紊乱可导致先天性一tl,脏病。目前心血管系统疾病已经 成为威胁人类健康最大的两个敌人之一。鉴定在心脏发育过程中起调 控作用的基因祁分子途径，将促进人们从分子水平认识心脏发育和先 天性心脏病发生的机制。MAPK信号传导途径是广泛存在于脊椎动 物细胞调控的一种机制，许多转录因子是重要的MAPK靶分子。为 了鉴定控制心脏发育和疾病发生的新基因，本研究从心脏cDNA文库 体，Northern杂交结果表明其仅在心脏、骨骼肌、肝脏、胰腺中有表 达，而在心脏的表达最强烈。通过构建增强型绿色荧光蛋白与hole 融合基因的真核表达系统，转染COS．7细胞系，瞬时表达后荧光显 微镜观察了它编码蛋白的活细胞定位及表达，表明hole蛋白主要在 细胞膜和细胞质中表达，而且在细胞质中点缀着大小不一的点状荧 光。DAND5基因位于19号染色体，属于DAN家族成员，己发现该 家族成员能通过与骨形成蛋白(BMP)结合从而抑制其信号的传导。 人类胚胎时期RT-PCR实验证明它在胚胎的各种组织中均有表达．利 DAND5的融合蛋白，转染COS．7细胞系，建立转基因的稳定表达细 胞系，通过免疫组化染色证明DAND5蛋白主要在细胞质中表达。Hole 抑制因子介导细胞功能。 关键词：心脏发育，hole，DAND5，MAPK，转录活性 Theheartisone offirststructurestoform in during organogenesis 0 isa and vertebrate．Cardiogenesisvery it complex process requires ofseriesof identification preciseregulation genes．The ofthemolecular that hean will a basic guide pathways rnorphogenesisprovide ofhowheartisformedand how understanding of heart congenital taken diseaseshave diseases(CHD)are become place．Cardiovascular oneofthetwomostseriousdiseasesthat human threaten isa beings．It critical to the understandnormal