实验五-从番茄酱中提取番茄红素和beta胡萝卜素901809322.ppt

实验五：从番茄酱中提取番茄红素和?-胡萝卜素 实 验 目 的 学习从固体中萃取有机化合物的方法 学习用薄层层析法检验有机化合物的基 本原理。 学习点样，展开和计算Rf值的方法 天然产物中有机成分的提取方法 浸取法：选用合适的溶剂，根据相似相溶原理，直接把溶剂加到固体样品上加热回流提取，本次试验就用的是此法。平时熬中药也是使用该方法。用水煮中药就是把中药的有效成分提取出来。 水蒸汽蒸馏法：天然动植物中含有一些较易挥发的成分。利用水蒸汽可以把这些物质蒸出提取。天然的很多香料的提取（如橙油的提取）就是用的此法。 连续提取法：原理同第一种方法，但是使用了一种特殊的装置—索氏提取器。使用少量的溶剂能重复用来浸取达到浓缩的目的。如：茶叶种咖啡因的提取就是用此法。 加热回流装置图 两种化合物的结构 本实验中薄板层析的爬板 色谱法包括薄层法、柱色谱、纸色谱、气相色谱和液相色谱，本学期只作薄层色谱。 色谱法是分离和鉴定有机化合物的常用方法。 原理：利用混合物各组分在固定相和流动相中溶解度不同，即在两相间中分配系数的不同而使各组分分开。 特点：时间短，分离效果好，需要样品量少。适用于在较高温度下容易发生化学变化的化合物。 1. 薄层色谱法 事先准备：用铅笔和尺子轻轻画出起始线和终止线； 点样：用直径1mm的平头毛细管点取提取物，先在废纸上点一下（快速），然后在起始线线上少量多次地点样（保证一定浓度，一般需要50次以上）。待溶剂挥发以后，轻放到装好展开剂的展开缸内，不要让展开剂溅起或倾斜。 展开（爬板）：当展开剂爬到终止线时，停止爬行，取出。因为?-胡萝卜素（黄点）易挥发，所以要尽快画出黄点的位置； Rf值的计算：分离效果好时Rf应为0.15 ~ 0.7 意义：定性鉴定，监测化学反应等。 点样：再薄板一端10mm（下）及另一端5mm（上）处用铅笔轻轻画一道痕迹，用直径小于1mm的毛细管（平口）点样，点样时样点一定要小，可重复再一点上点几次，使样品点小而又有一定的浓度，一块板上可以点两点； 展开剂的选择：根据样品的极性而定，极性大的化合物可选用极性较大的展开剂。为达到较好的分离效果，可用混合溶剂。做多次展开后可确定一合适的配比。展开时，至溶剂前沿离板顶5mm停止。 显示方法： A)有色化合物可直接观察； B)无色的，用显色剂显色，如碘熏法；紫外光显色，用硅胶GF254，有样品点的位置再紫外灯光照射下发暗。 Rf值计算公式：Rf=溶剂的最高浓度中心 ? 溶剂前沿至原点中心的距离。 注 意 事 项 本次实验使用95％乙醇和石油醚提取。两种混合后用NaCl水溶液洗涤。乙醇主要进入水相，建议水相不要弃去。点样时在一块板上点两点：一为有机相，一为水相。观察比较有何不同。 展开剂的配比一定要控制为石油醚:丙酮=9:1。否则分离效果不太好。同时可以做一个比较，采用12:1。在混合展开剂中丙酮的极性大于石油醚，因此如果丙酮含量增大，极性增大，使得分离效果很差。如果增加石油醚的含量，使展开剂的极性变小，分离效果较好 观察：如果红点紧追黄点，且Rf0.75，则要增加石油醚的用量如达到12:1。 注意事项（II） 番茄红素为红色，?-胡萝卜素为黄色，展开后的薄板放置一段时间后，样品颜色褪去。因为?-胡萝卜素极易氧化，故在提取和展开过程中，注意不要敞开口，要用瓶盖盖住。 番茄红素的双键比?-胡萝卜素的双键多，因此番茄红素的极性大，在爬板时爬得慢，在下面。?-胡萝卜素的极性小，爬得快，且易氧化。 展开缸用后不要用水洗！ 薄板展开后临摹在实验报告上，板用后洗干净放回窗台上地塑料筐内。 要 求 在实验报告临摹一块走好的薄板—最理想的，如果第一块走的很好的话，就不用再走其他的板了。 薄层层析在有机化学中的应用 薄层层析在有机化学中有好多种用途，主要如下： 1 证实两个化合物相等； 2 测定混合物中组分的数目； 3 决定适用于柱层析分离用的溶剂； 4 监控柱层析分离； 5 检查柱层析、结晶或萃取所达到的分离的有效度； 6 监控一个反应的进程。 薄层层析（TLC）的优缺点 优点：只需使用少量物料，物料不浪费。用许多种显示法中，可以检测出少于十分之一微克（10 -7克）的物料； 另一方面，也可使用多达1mg的样品，使用尺寸大（边长9英寸），涂层相对较厚（大于500微米）的制备性大板，往往一次就可能分离0.2~0.5g物料。 主要缺点是不能用于挥发性的物料，因为它们会从板上挥发掉。 薄层层析可以证实两个猜想等同的化合物事实上确实等同。只需将两个化合物并排地点在一块板上，然后将板展开。如果两个化合物在板上移动同样的距离，即有同一Rf值，它们就有可能是等同的。如果斑点的位置不一样，则这两个化合物肯定是不同的。重要的是将两个化合