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实验五:从番茄酱中提取番茄红素和?-胡萝卜素 实 验 目 的 学习从固体中萃取有机化合物的方法 学习用薄层层析法检验有机化合物的基 本原理。 学习点样,展开和计算Rf值的方法 天然产物中有机成分的提取方法 浸取法:选用合适的溶剂,根据相似相溶原理,直接把溶剂加到固体样品上加热回流提取,本次试验就用的是此法。平时熬中药也是使用该方法。用水煮中药就是把中药的有效成分提取出来。 水蒸汽蒸馏法:天然动植物中含有一些较易挥发的成分。利用水蒸汽可以把这些物质蒸出提取。天然的很多香料的提取(如橙油的提取)就是用的此法。 连续提取法:原理同第一种方法,但是使用了一种特殊的装置—索氏提取器。使用少量的溶剂能重复用来浸取达到浓缩的目的。如:茶叶种咖啡因的提取就是用此法。 加热回流装置图 两种化合物的结构 本实验中薄板层析的爬板 色谱法包括薄层法、柱色谱、纸色谱、气相色谱和液相色谱,本学期只作薄层色谱。 色谱法是分离和鉴定有机化合物的常用方法。 原理:利用混合物各组分在固定相和流动相中溶解度不同,即在两相间中分配系数的不同而使各组分分开。 特点:时间短,分离效果好,需要样品量少。适用于在较高温度下容易发生化学变化的化合物。 1. 薄层色谱法 事先准备:用铅笔和尺子轻轻画出起始线和终止线; 点样:用直径1mm的平头毛细管点取提取物,先在废纸上点一下(快速),然后在起始线线上少量多次地点样(保证一定浓度,一般需要50次以上)。待溶剂挥发以后,轻放到装好展开剂的展开缸内,不要让展开剂溅起或倾斜。 展开(爬板):当展开剂爬到终止线时,停止爬行,取出。因为?-胡萝卜素(黄点)易挥发,所以要尽快画出黄点的位置; Rf值的计算:分离效果好时Rf应为0.15 ~ 0.7 意义:定性鉴定,监测化学反应等。 点样:再薄板一端10mm(下)及另一端5mm(上)处用铅笔轻轻画一道痕迹,用直径小于1mm的毛细管(平口)点样,点样时样点一定要小,可重复再一点上点几次,使样品点小而又有一定的浓度,一块板上可以点两点; 展开剂的选择:根据样品的极性而定,极性大的化合物可选用极性较大的展开剂。为达到较好的分离效果,可用混合溶剂。做多次展开后可确定一合适的配比。展开时,至溶剂前沿离板顶5mm停止。 显示方法: A)有色化合物可直接观察; B)无色的,用显色剂显色,如碘熏法;紫外光显色,用硅胶GF254,有样品点的位置再紫外灯光照射下发暗。 Rf值计算公式:Rf=溶剂的最高浓度中心 ? 溶剂前沿至原点中心的距离。 注 意 事 项 本次实验使用95%乙醇和石油醚提取。两种混合后用NaCl水溶液洗涤。乙醇主要进入水相,建议水相不要弃去。点样时在一块板上点两点:一为有机相,一为水相。观察比较有何不同。 展开剂的配比一定要控制为石油醚:丙酮=9:1。否则分离效果不太好。同时可以做一个比较,采用12:1。在混合展开剂中丙酮的极性大于石油醚,因此如果丙酮含量增大,极性增大,使得分离效果很差。如果增加石油醚的含量,使展开剂的极性变小,分离效果较好 观察:如果红点紧追黄点,且Rf0.75,则要增加石油醚的用量如达到12:1。 注意事项(II) 番茄红素为红色,?-胡萝卜素为黄色,展开后的薄板放置一段时间后,样品颜色褪去。因为?-胡萝卜素极易氧化,故在提取和展开过程中,注意不要敞开口,要用瓶盖盖住。 番茄红素的双键比?-胡萝卜素的双键多,因此番茄红素的极性大,在爬板时爬得慢,在下面。?-胡萝卜素的极性小,爬得快,且易氧化。 展开缸用后不要用水洗! 薄板展开后临摹在实验报告上,板用后洗干净放回窗台上地塑料筐内。 要 求 在实验报告临摹一块走好的薄板—最理想的,如果第一块走的很好的话,就不用再走其他的板了。 薄层层析在有机化学中的应用 薄层层析在有机化学中有好多种用途,主要如下: 1 证实两个化合物相等; 2 测定混合物中组分的数目; 3 决定适用于柱层析分离用的溶剂; 4 监控柱层析分离; 5 检查柱层析、结晶或萃取所达到的分离的有效度; 6 监控一个反应的进程。 薄层层析(TLC)的优缺点 优点:只需使用少量物料,物料不浪费。用许多种显示法中,可以检测出少于十分之一微克(10 -7克)的物料; 另一方面,也可使用多达1mg的样品,使用尺寸大(边长9英寸),涂层相对较厚(大于500微米)的制备性大板,往往一次就可能分离0.2~0.5g物料。 主要缺点是不能用于挥发性的物料,因为它们会从板上挥发掉。 薄层层析可以证实两个猜想等同的化合物事实上确实等同。只需将两个化合物并排地点在一块板上,然后将板展开。如果两个化合物在板上移动同样的距离,即有同一Rf值,它们就有可能是等同的。如果斑点的位置不一样,则这两个化合物肯定是不同的。重要的是将两个化合
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