第19章色谱法分离的基本原理.ppt

III篇 分离方法 第19章 色谱法分离原理 19-1 概 述 色谱法(Chromatography)与蒸馏、重结晶、溶剂萃取、化学沉淀及电解沉积法一样是一种分离分析方法。 色谱法由俄国植物学家茨维特(Tsweet)早在1903年创立。 茨维特在研究植物叶子的色素成分时，将植物叶子的石油醚萃取物，倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分在玻璃管内互相分离，形成不同颜色的谱带，因看到色带与光谱一样，因此取名为色谱法。 在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相； 自上而下流动的一相（一般是气体或液体）称为流动相； 装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱。 色谱法的分类 按相系统的形式与特征分为柱色谱、平板色谱。 固定相装于柱内流动相依靠重力或外加压力的作用使其流动并达到色谱分离的方法，称为柱色谱。 固定相均匀的铺在玻璃板上或直接利用多孔滤纸作固定相，流动相借助毛细现象或重力作用达到色谱分离的方法，因这类方法固定相呈平板状，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。 依据两相物理状态分类 依据流动相的物理状态分为： 气相色谱（GC）； 液相色谱（LC )； 超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色谱（SFC）。 气相色谱又可分为气固色谱（GSC）和气液色谱（GLC）。 液相色谱亦可分为液固色谱（LSC）和液液色谱（LLC） 按色谱动力学过程，可将色谱法分为： 迎头法、顶替法和洗脱法色谱法。 洗脱法也称冲洗法。工作时，首先将样品加到色谱柱头上，然后用吸附或溶解能力比试样组分弱得多的气体或液体作冲洗剂。由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力不同，被冲洗剂带出的先后次序也不同，从而使组分彼此分离。 顶替法是将样品加到色谱柱头后，在惰性流动相中加入对固定相的吸附或溶解能力比所有试样组分强的物质为顶替剂（或直接用顶替剂作流动相），通过色谱柱，将各组分按吸附或溶解能力的强弱顺序，依次顶替出固定相。 迎头法是将试样混合物连续通过色谱柱，吸附或溶解能力最弱的组分首先以纯物质的状态流出，其次则以第一组分和吸附或溶解能力较弱的第二组分混合物，以此类推。 按分离原理分类 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法，称为吸附色谱法。 利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法。 利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法，称为离子交换色谱法。 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法。 最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。 19-2 线性洗脱色谱及有关术语 洗脱色谱是基于样品组分在固定相和流动相之间达到分配平衡，并随着流动相向前流动时，反复多次的达到这种分配平衡。 由于这个过程涉及到两相之间的分配平衡，所以可以用分配系数K来进行定量讨论。分配系数K指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值。 分配等温线 图19-1是溶质在固定相和流动相中之间的分配等温线。若分配系数K与浓度无关，则分配等温线是线性（图中C线）所进行的色谱过程为线性色谱。 A、B型曲线是一条典型的吸附等温线。吸附色谱法属于这类线曲。 从图19-1可以看出，溶质浓度低时Cs基本上正比于Cm，曲线近似于直线，一般情况下由于色谱柱中溶质的浓度较低．因此可以认为K为常数。K为常数时所进行的色谱过程称为线性色谱。 容易理解，溶质流过色谱柱时，分配系数K值大，则保留时间就长，分配系数K值小，则保留时间就短。由于不同的组分这种分配系数上的差异，产生流动的速率不同，最终实现组分的分离。 色谱法常用术语 （一）色谱流出曲线和色谱峰 由检测器输出的电信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱流出曲线。曲线上突起部分就是色谱峰。 如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线（气固吸附色谱）或分配等温线（气液分配色谱）的线性范围内，则色谱峰是对称的。 （二）基线 色谱柱后仅有流动相流出，并通过检测器检测的信号。稳定的基线应该是一条水平直线。 （三）峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示。 （四）保留值 1. 死时间tM 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积。 因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其流动速度将与流动相流动速度相近。测定流动相平均线速ū时，可用柱长L与t0的比值计算，即