猪_型和_型干扰素的克隆_表达和抗病毒活性比较_陈雪梅.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, June 25; 25(6): 806-812 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 动物及兽医生物技术 I II 陈雪梅, 薛清华, 祝荣格, 付显华, 杨利敏, 孙蕾, 刘文军 中国科学院病原微生物及免疫学重点实验室 中国科学院微生物研究所分子病毒中心, 北京 100101 摘 要: 干扰素(IFN)是由多种细胞受病毒感染或其他生物诱导剂刺激而产生的天然蛋白质, 主要功能为抗病毒增殖、 调节免疫反应和激活免疫细胞等。本研究克隆并测序了猪干扰素(PoIFN)α 、γ 、α γ及ω基因。构建原核表达载体 pET-His/PoIFN-α 、pET-His/PoIFN-γ 、pET-His/PoIFN- αγ和pET-His/PoIFN- ω, 转化大肠杆菌 Rosetta(DE3)进行表达, 经 纯化、复性得到具有生物学活性的蛋白。用细胞病变抑制法在Marc-145/PRRSV 、Marc-145/VSV 、PK-15/VSV 、Vero/VSV 、 MDBK/VSV 系统上进行抗病毒活性测定, 结果表明猪α和αγ融合干扰素有较为显著的抗病毒活性, 抗PRRSV 活性高达 108 U/mg; 猪γ干扰素活性效价约为α干扰素的 1/2 到 1/3; 猪ω干扰素几乎未检测到抗病毒活性, 需进一步验证。本研究 对干扰素在抗病毒、提高机体免疫方面的应用提供了理论依据。 关键词: 猪干扰素, 抗病毒活性 Comparison of antiviral activities of porcine interferon type I and type II Xuemei Chen, Qinghua Xue, Rongge Zhu, Xianhua Fu, Limin Yang, Lei Sun, and Wenjun Liu Chinese Academy of Sciences Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology , Center for Molecular Virology, Institute of Microbiology , Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China Abstract: Interferons (IFNs) are natural proteins produced by wide variety of cells in response to viral infection or other biological inducers, and they execute diversified functions as antiviral defense, immune activation and cell growth regulation. Four genes encoding porcine interferons (PoIFN), PoIFN-α, PoIFN-γ, PoIFN-αγ or PoIFN-ω, were cloned and sequenced. The four types of p