荧光定量PCR的原理和应用探析.ppt

PCR的原理和应用 体内DNA复制的过程 类似于DNA的天然复制过程： 1.半保留复制 2.半不连续合成 :一条链是连续合成的(前导链leading strand), 而另一条链（随从链，lagging strand）是不连续合成的：冈琦片段。 3.合成过程： 3.1合成起始 a.螺旋的松弛与解链:拓扑异构酶 ;解链酶 （helicase） ,单链结合蛋白（SSB） b. 引发 ：引物酶（primase）以DNA为模板，自5‘→3’合成RNA小片段约十几到几十个核苷酸。 引发前体（preprimosome） ?㈡ DNA链的延长 反应体系：DNA模板，DNA聚合酶，dNTP，  引物，Mg2+?反应式：DNA+dNTP→（DNA）n+1+ppiDNA 聚合酶：催化5‘→3’ DNA合成；3‘→5’外切酶活性：去除 错误碱基，有校对作用；5→3外切酶活性，去除RNA引物及修正错误碱基。 ㈢终止 连接酶（ligase）：使相邻的DNA片段,以3,5磷酸二酯键相连，需ATP供能。 PCR 技术的基本原理 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：93℃-96 ℃ ②模板DNA与引物的退火(复性) ：50 ℃ -68 ℃ 　　 ③引物的延