第二章核酸的生物合成.pptVIP

核酸的生物合成 第一节 DNA的生物合成 第二节 RNA的生物合成 第三节 基因工程的简介 中心法则的遗传流向有5条途径 1、DNA→DNA：DNA复制 （以DNA为模板合成DNA） 2、RNA →RNA：RNA复制 （以RNA为模板合成RNA） 3、DNA → RNA：DNA转录 （以DNA为模板合成RNA） 4、RNA → DNA：反(逆)转录 （以RNA为模板合成DNA） 5、RNA → Protein：翻译 第一节 DNA的生物合成 一、DNA的半保留复制 二、与DNA复制有关的酶和蛋白质 三、DNA的复制过程 四、逆转录 五、DNA的损伤修复 一、DNA的半保留复制 定义：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式叫半保留复制 半保留复制的实验证据:1958年Meselson和Stahl用同位素15N标记大肠杆菌DNA,首先证明了DNA的半保留复制。 DNA的半保留复制的生物学意义： DNA的半保留复制表明DNA在代谢上的稳定性，保证亲代的遗传信息稳定地传递给后代。 DNA在代谢上的稳定性并非指DNA是一种惰性物质。 二、与DNA复制有关的酶和蛋白质 原料：四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、 dCTP、dTTP) 模板：以DNA的两条链为模板链，合成子代DNA。 引物：一小段RNA(或DNA）为引物，在大肠杆菌 中，DNA的合成需要一段RNA链作为引物。 催化因子 1.引物合成酶（引发酶）：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 2.DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶，其催化反应的特点 （1）以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物；（2）反应需要有模板的指导；（3）反应需要有3?-OH存在； （4）DNA链的合成方向为5 ? ? 3 ? （5） DNA聚合酶的反应可以利用DNA双链作为模板和引物，亦可以单链DNA作为模板和引物 （6）DNA的体外聚合必须加入少量的DNA才能进行。DNA在提取过程中易形成切口（nick）或缺口（gap）.则加入的DNA一条链作为模板而另一条链可作为引物。 原核生物中的DNA聚合酶 在大肠杆菌中发现有三种DNA聚合酶（用突变株研究其功能）： ⑴ DNA聚合酶Ⅰ:单体酶,多肽链内含一个锌原子（其鳌合剂是O-二氮杂菲），多功能酶。它具有5?? 3 ?聚合酶功能（对脱氧核苷酸的选择）； 3’ ? 5’外切酶活性（对双链无作用，校对功能。但在正常聚合条件下，此活性不能作用于生长链）及5’ ? 3’外切酶活性（双链有效，主要是对DNA损伤的修复，以及在DNA复制时RNA引物切除及其空隙的填补）；在DNA链的3 ? 形成焦磷酸键（生理意义不大）；无机焦磷酸盐与dNTP之间的焦磷酸基交换。 ⑵ DNA聚合酶Ⅱ：多亚基酶，聚合作用，但聚合活力很低；具有3’ ? 5’外切酶活性。其它生理功能尚不清楚，可能在修复紫外光引起的DNA损伤中起作用。 DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ 亚基数目 1（单体酶） ＞1（多亚基酶 ） ＞1（多亚基酶） 5’ 3’聚合活性 + 中 + 很低 + 很高 3‘ 5’外切活性 + + + （保护DNA复制的 忠实性） 5‘ 3’外切活性 + - - 在真核细胞内有五种DNA聚合酶 （与细菌DNA聚合酶的性质基本相同：底物、模板、引物、方向） α β γ δ ε 定位 细胞核 细胞核 线粒体 细胞核 细胞核 3‘-5’ 外切 - - + + + 酶活性 功能 3 .DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端