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第四章、酶 酶的发现和提出：1897年，Buchner兄弟用不含细胞的酵母汁成功实现了发酵。提出了发酵与活细胞无关，而与细胞液中的酶有关。 1903年，Henri提出了酶与底物作用的中间复合物学说。 1913年，Michaelis和Menten提出了酶促动力学原理—米氏学说。 1925年，Briggs和Handane对米氏方程做了修正，提出了稳态学说。 1926年，Sumner从刀豆种子中分离、纯化得到了脲酶结晶，首次证明酶是具有催化活性的蛋白质。 1930年 Northrop 分离得到胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶结晶并证实其均为蛋白质，酶的蛋白质本质确立。 酶的概念 酶（Enzyme）的概念 酶是活细胞产生的一类具有催化功能的蛋白质，亦称为生物催化剂Biocatalysts 。 绝大多数的酶都是蛋白质(Enzyme和Ribozyme)。 酶催化的生物化学反应，称为酶促反应Enzymatic reaction。 在酶的催化下发生化学变化的物质，称为底物substrate。 一、酶催化作用的特点 （一）酶和一般催化剂的比较 它能够改变化学反应的速度，但是不能改变化学反应平衡。酶本身在反应前后也不发生变化。 酶能够稳定底物形成的过渡状态，降低反应的活化能，从而加速反应的进行。 1．酶易失活 凡能使蛋白质变性的因素如强酸、强碱高温等条件都能使酶破坏而完全失去活性。所以酶作用一般都要求比较温和的条件如常温、常压和接近中性的酸硷度。 3．高度专一性（Specificity） 酶的专一性 Specificity又称为特异性，是指酶在催化生化反应时对底物的选择性，即一种酶只能作用于某一类或某一种特定的物质。亦即酶只能催化某一类或某一种化学反应。 　例如：蛋白酶催化蛋白质的水解；淀粉酶催化淀粉的水解；核酸酶催化核酸的水解。 4.酶活力可调节和控制 （1）酶浓度的调节 诱导或抑制酶的合成 调节酶的降解 （2）激素调节酶的活性 （3）反馈抑制调节酶的活性 （4）抑制剂和激活剂的调节 （5）其他调节方式。 共价修饰调节、别构调节、酶原激活、同功酶等。 （附加内容）、酶的活力测定和分离纯化 （一）酶活力的测定 1. 酶活力（enzyme activity）：也称酶活性，指酶催化一定化学反应的能力。其大小可用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的反应速率（reaction rate）来表示。 酶反应速度：用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。单位：浓度/单位时间 影响酶促反应速度的因素 在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。 当底物浓度达到一定值，反应速度达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。 （一）酶与底物的中间络合物学说（Henri和Wurtz） 该学说认为当酶催化某一化学反应时，酶首先和底物结合生成中间复合物（ES），然后生成产物（P），并释放出酶。 S+E ES P+E 1.米氏方程的推导 在Michaelis和Menten的酶促反应动力学基础上，1925年，Briggs和Haldane提出酶反应分两步进行，即“稳态平衡”理论： 所谓稳态是指反应进行一段时间后，系统的复合物ES浓度，由零逐渐增加到一定数值，在一定时间内，尽管底物浓度和产物浓度不断地变化．复合物ES也在不断地生成和分解，但是当反应系统中ES的生成速率和ES的分解速率相等时，络合物ES浓度保持不变的这种反应状态称为稳态，即： 第一步： 第二步： 2.动力学参数的意义 ①Km是酶的一个重要的特征常数。 只与酶的性质有关，而与其浓度无关。Km值只是在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的Km值。 Km值可用来鉴别酶。 ②Km值可以判断酶的专一性和天然底物。 有的酶可作用于几种底物，因此有几个 Km 值，同一种酶有几种底物就有几个Km值，其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物。1/Km值可近似地表示酶对底物亲和力的大小， 1/Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; 1/Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。 可判断酶的专一性。 ③Km与Ks Km不等于Ks 。在K3K1、K2时， Km看作Ks，也只有此时1/Km 才可以近似表示酶与底物结合的难易程度。  ④若已知某个酶的Km值，可以计算在某一个底物浓度时，反应速率相当于最大反应速率Vmax的百分率。 如：[S]=3Km时，根据： 3. 利用作图法测定Km和Vmax 1 Km 1 1 ??? = ??? ? ??