虎杖苯亚甲基丙酮合酶PcPKS2的表达纯化与晶体生长.PDF

250 生 物 工 程 学 报 马文瑞 等/虎杖苯亚甲基丙酮合酶PcPKS2 的表达纯化和晶体生长 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn February 25, 2016, 32(2): 250−258 DOI: 10.13345/j.cjb.150234 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved 生物技术与方法 PcPKS2 1 2 2 2 2 2 2 马文瑞 ，柳春梅 ，杨明峰 ，薛飞燕 ，陈青 ，马兰青 ，吕鹤书 1 102206 2 () 102206 , , , . PcPKS2 . , 2016, 32(2): 250–258. Ma WR, Liu CM, Yang MF, et al. Preparation and crystallization of Polygonum cuspidatum Benzalacetone synthase. Chin J Biotech, 2016, 32(2): 250–258. 摘 要: 植物类型Ⅲ聚酮合酶超家族 (PKSs) ，又称查尔酮合酶 (Chalcone synthase ，CHS) 超家族，催化合成 多种植物次生代谢产物的分子骨架。苯亚甲基丙酮合酶 (Benzalacetone synthase ，BAS) 催化4-香豆酰辅酶A 与丙二酰辅酶 A 通过一步脱羧缩合反应生成苯亚甲基丙酮，是一系列具有重要生物学活性苯丁烷类化合物及 其衍生物的前体化合物。前期工作从虎杖中分离出苯亚甲基丙酮合酶BAS (PcPKS2) 和 1 个具有CHS 和BAS 活性的双功能酶 (PcPKS1) 。两者与超家族其他成员序列经比较，在包括门卫氨基酸Phe215 和Phe265 在内的 重要氨基酸序列存在一定差异。已有蛋白晶体学研究结果表明，PKSs 家族不同成员的功能多样性来自于酶催 化位点的非常微小的构象变化。为了能够从结构上比较PcPKS2 和PcPKS1 双功能酶活性差异可能产生的机制， 以确定其高效BAS 活性的分子机理，研究利用了大肠杆菌原核表达系统过量表达了C-端融合有His6 标签的重 组蛋白，经纯化得到了高纯度蛋白。经过对其晶体生长条件进行摸索和优化，得到了能用于 X-射线衍射的单 晶，为其结构解析、催化机理研究、了解虎杖聚酮类化合物生物合成机制和该类酶在基因工程中的应用提供了 基础。 : 虎杖，苯亚甲基丙酮合酶，晶体生长 Received: May 20, 2015; Accepted: October 27, 2015 Supported by: National Natural Science Foundation of China (Nos., Foundation of Beijing Municipal Education Committee (Nos. KM201410020001, KM201310020002), Funding for Promotion of Personnel Training and Reform in Beijing University of Agriculture, 20