3.抗菌药物的体内外活性评价方法.pptVIP

Response Surface Approach Response Surface Approach 三、 联合药敏测定方法2. 时间-杀菌曲线法 药物联合应用效果时间-杀菌曲线示意图 联合药敏-- 杀菌曲线法结果判断 测定抗菌药物联用（24～48h）效果时应遵循以下标准： 与活性最强的成分相比，每毫升CFU的常用对数值下降≥2定义为协同； 与活性最低的成分相比，每毫升CFU的常用对数值升高≥2定义为拮抗； 与活性最强的成分相比，每毫升CFU的常用对数值下降＞1且＜2定义为相加； 与活性最低者相比，每毫升CFU的常用对数值升高＞1且＜2为无关。 联合药敏测定方法 时间-杀菌曲线法 时间-杀菌曲线法可提供以下信息： 药物抗菌活性的速度和程度； 药效学参数（如浓度-效应关系及后效应）； 抗菌药物联用时的药效关系（协同、拮抗、相加或无关）。 四、血清杀菌活性/滴度 SBA：Serum Bactericidal Activity SBT: Serum Bactericidal Titer 方法：患者给药后一定时间（一般为峰浓度时间）采血，测定能抑制细菌生长的最高血清稀释倍数 样品：血样、胰液、肺泡液、尿液…. 国外应用情况 国内研究应用情况. 血清杀菌活性/滴度 SBA与MIC的区别： 测定SBA的临床意义： 临床上对于一些难治性感染，如心内膜炎、脑膜炎等，可以利用血清杀菌滴度调整治疗方案,当SBA≧1：8时，对上述难治性感染可获得较好的疗效。 五、抗菌药物对细菌形态影响的研究方法进展 光镜：各种染色 电镜 激光共聚焦显微镜 白念 黑曲霉 THANKS 曲霉病 黑曲霉 * 抗菌药物活性评价方法研究进展 　　山东省千佛山医院　孙淑娟 CONTENTS 抗菌药物敏感性实验测定方法 MIC、MBC测定 杀菌曲线 联合药效测定 血清杀菌活性/滴度 抗菌药物对细菌形态影响研究进展 抗菌药物抗菌活性评价方法 体外： 药物敏感性实验 MIC/MBC测定 时间-杀菌曲线 联合药敏试验 抗生素后效应：PAE 体内 ： ED50（动物） 临床有效率与细菌清除率 抗生素后效应 血清杀菌滴度(SBA) ???? 一、药物敏感性实验测定方法MIC/MBC测定  NCCLS：National Committee for Clinical Laboratory Standards Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) 药物敏感试验：MIC测定 纸片法:K-B法(定性法） 　　　　 定量纸条法（E-test）　　 稀释法：常量法：试管稀释法(1－2ml) 微量法：肉汤稀释法(0.1-0.2ml)： 肉眼观察、OD、MTT、XTT 琼脂稀释法 1. 纸片法（Disk Diffusion Assay) 又称K-B法（Kirby-Bauer)：利用含一定浓度抗菌药物的滤纸片贴附在涂布受试菌的琼脂平板，孵育18-24h后，据抑菌圈的大小判定细菌对抗生素的敏感性，该法简便，是临床抗菌药物敏感性检测定性的常用方法； 菌液浓度一般为104cfu/ml 。 抑菌圈直径解释标准。 报告(定性）：针对抑菌圈直径测量值报告敏感、中介、耐药。 影响因素：琼脂成分、孵化温度、细菌接种量、抗菌药物纸片含量。 2. Epsilometer Test 特点： 新 综合了定性（易操作）及定量的特点， 可从含药梯度条上能直接读出MIC值 费用高限制了其应用。　 3.稀释法 MIC测定是将细菌与系列稀释的抗菌药物共同孵育18－24h，观察能抑制细菌生长的最低浓度 ，MBC则是在此条件下，使受试菌99.9%被杀灭的最低药物浓度。MBC测定需要进行菌落计数。 实验用细菌浓度：1～5×105　CFU/ml(colony forming units) MIC测定方法及终点 MIC终点： 100%抑制，细菌 80%抑，真菌 50% 研究 肉眼观察 比浊(类OD) 比色：采用氧化-还原指示剂进行比色分析的终点判读方法 噻唑蓝 （MTT) ，甲基四氮盐（XTT)。 结果影响因素 培养基及其所含阳离子（生理水平的钙、镁离子影响氨基糖苷类的抗菌活性、pH值、血清蛋白) 菌液浓度 培养温度与时间 观察与测定方法 药敏报告的临床意义 敏感(Sensitive S)：表明该菌株所致感染，用此药物正常剂量，除非存在禁忌症。 中介(Intermedium I): 此菌所致的感染可以用此药，但需加大剂量。 耐药（Resistance