第4章 胚胎培养.ppt

胚胎培养 主讲教师 荣海燕 主要内容 含义 第一节 胚培养 第二节胚乳培养 第三节胚珠和子房培养 第四节 其它生殖器官培养 复习思考题 含义 采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 第一节 胚培养 一、培养类型 二、培养过程 三、培养基与培养条件 四、胚培养的应用 一、培养类型 1.幼胚培养过程 （1）子房表面消毒后，在无菌条件和高倍解剖镜下切取完整胚，然后接种。 （2）幼胚培养的发育途径 按正常胚胎发育途径形成植株 胚“早熟萌发” 脱分化形成愈伤组织 1. 培养基： White Rangwang MS B5 Nitsch 无机盐+糖(3-5%)+生长辅助物质(维生素、AA、椰乳等) 有利，光照不利于胚根生长。 2.培养条件： A.pH值在5.2-6.3，与植物有关。 B.温度：多数胚25℃，有的需变温或较低较高温度。 C.光照：通常弱光培养。光暗交替有利幼胚生长 应用 ①克服远缘杂种的不育性。 ②使胚发育不全的植物获得后代。 ③缩短育种年限。 ④研究与胚发育有关的内外因素。 含义 将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 胚乳培养的意义 胚乳培养再生植株证明了全能性理论； 研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能； 再生植株多为三倍体，产生无籽果实； 可以从胚乳愈伤中分离和筛选各种类型的非整倍体植株。 胚乳细胞是研究淀粉、蛋白质和脂类天然产物代谢途径的理想系统。 胚乳培养的方法 胚乳愈伤组织的建立 绝大多数经历愈伤组织阶段（器官发生），极少数直接从胚乳直接分化器官(胚状体)。 胚乳发育时期 发育早期的胚乳，接种不方便，愈伤组织的诱导频率很低。 处于旺盛生长期的胚乳，离体条件下最易诱导产生愈伤组织。 接近成熟或完全成熟的胚乳，愈伤组织诱导频率很低。 二.培养基与培养条件 （二）胚在胚乳培养中的作用 旺盛期的未成熟胚乳，在诱导培养基上无需原位胚的参与，就能形成愈伤组织。 完全成熟的胚乳，生理活动很弱，在诱导脱分化前，必须借助于原位胚的萌发，使其活化。 胚在萌发时产生某种物质“ 胚因子”。外源GA3能部分取代胚因子。 种子结构 第二节胚乳培养 1. 胚乳 X＝3（2♀极核＋1♂精子） 是营养组织，影响胚的发育。 有些植物在胚发育过程中把胚乳消耗尽（豆科和葫芦科）； 有些植物，胚乳在成熟种子中存在，贮存大量营养物质（禾谷类，椰子，咖啡） ★ 旺盛期胚乳特征 §胚已分化完成 §胚乳已形成细胞组织 §充分生长，达到成熟大小 §外观为半透明的固体状 §富有弹性 水稻：授粉后4 d 黑麦草：授粉后8 ~ 10 d 黄瓜：授粉后7 ~ 16 d 梨：授粉后20 d 大麦：授粉后10 ~ 20 d 玉米和小麦：授粉后8 ~ 12 d 一些草本植物胚乳培养的适宜取材时期 一般情况下：接近成熟或完全成熟的胚乳callus诱导率很低，甚至无callus 木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和诱导产生callus （一）培养基及植物生长物质 WT、MS＋植物激素 生长素＋细胞分裂素合理搭配，效果更好 一般植物 均适宜 特殊种类激素 如: 大麦＋2,4-D 猕猴桃＋玉米素 无特别要求，任何一种生长素均可 如:枣 （三） 培养方法： A、取授粉4-8d后的幼果，常规消毒 B、无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳 C、接种在培养基上，在25-27℃和黑暗条件或散射光下培养形成愈伤组织 D、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后，切下不定芽 E、插入生根培养基中，光下培养10-15d，切口处长出白色的不定根 胚乳培养过程 胚乳 胚状体发育成苗 不定芽苗 柚，柑桔和枣 大麦, 水稻, 玉米, 苹果, 马铃薯 愈伤组织 形态发生 （四）胚乳培养的应用 培养胚乳的首要目的是为了直接获得三倍体植株。 三倍体——六倍体——生产 倍性多样性——筛选非整倍体植株 杂种胚乳—附加系和换代系—遗传育种 第三节胚珠和子房培养 柱头 花柱 子房 花梗 花托 花组成 胚囊 卵细胞 株心 珠 孔 反足细胞 珠 被 胚　珠 极核 株柄 未受精胚珠 受精胚珠 愈伤组织 发育成种子 大孢子或卵分化为单倍体植株