拟南芥t-dna插入突变纯合体的鉴定.pptVIP

拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 实验目的 1．熟练掌握植物基因组DNA快速提取的方法； 2．掌握利用PCR方法鉴定拟南芥T-DNA插入突变体的方法。 T-DNA插入鉴定的原理 突变体鉴定的步骤 T-DNA插入基因的基因组序列； T-DNA插入方向的确定； T-DNA插入位置的确定； 引物设计； PCR扩增； 电泳检测。 T-DNA插入基因的基因组序列 点击基因编号进入网页 点击sequence viewer进入 点击nucleotide view进入 点击突变体编号后进入的网页 进入网站/cgi-bin/tdnaexpress 查找基因突变体及插入方向 基因方向 T-DNA方向 5’引物 3’引物 实验设计 Ext3=300bp；Bpos=110bp；N=0~300bp. 410+N=Ext3+Bpos+N BPos 引物设计 基因上面引物的设计可以通过下面提供的拟南芥网站/tdnaprimers.html进行自动生成，也可以根据自己的需要进行设计。一般进行鉴定的引物距离T-DNA插入的位置300bp以上为宜，即300+N bp。 LBa1 of pBIN-pROK2 for SALK lines：TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG 植物基因组DNA的快速提取 （1）取植物叶片（拟南芥一片叶子），置于1.5ml离心管中，加入400 ml提取缓冲液