6-3动物微生物--抗原抗体凝集实验和抗原抗体沉淀实验(实验七).ppt

一、凝集反应 凝集反应：在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原(如红细胞)与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。 　　人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无,可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B的抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B的抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。 　（1）ABO血型鉴定试剂盒内含: 抗A血清：为蓝色 抗B血清：抗B为黄色） 　（2）一次性采血针1枚、洁净玻片、75％酒精、灭菌棉签。 　（3）生理盐水 二、沉淀反应 二、沉淀反应 4)．温育 置湿盒37℃温育12-24 h。 4)．温育 置湿盒37℃温育12-24 h。 5. 结果观察 以出现明显沉淀线的最高稀释度为该兔抗人血清的效价。 记录琼脂玻片双向扩散是否有沉淀线,分布在哪几档稀释度之间? 并画图。 * 实验七 经典免疫学检测技术： 抗原抗体凝集实验和抗原抗体沉淀实验 一 、凝集反应 二 、沉淀反应 (一) ABO血型鉴定实验 抗原：能诱导机体产生体液抗体和细胞免疫应答，并能与抗体和致敏淋巴细胞在体外发生特异结合反应的物质。 抗体（免疫球蛋白）：机体在抗原物质刺激下所形成的一类能与抗原特异结合的血清活性成分。 1.ABO血型鉴定实验原理 抗A、抗B —、— O型 —、— A、B AB型 抗A B B型 抗B A A型 血清中Ab 红细胞表面Ag ABO血型的划分 2.实验材料 3.实验方法 （1）取载玻片1张，用记号笔划分为两格，分别注明A和B，各加1滴标准抗A和抗B的血清（抗体）。 （每人一张玻片） 抗B 血清 抗A 血清 A B 3.实验方法 （2）采血：酒精棉球消毒耳垂或手指末端后，用采血针刺破皮肤，取1滴血（可用牙签）直接放入抗A、抗B血清。 +抗A血清 +抗B血清 A B 3.实验方法 不凝集（-） 凝集（+） 如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为透明，并出现大小不等的红色凝集块者，即为红细胞凝集；如混合液仍呈均匀混浊状，则为不凝集。 （3）手持玻片，前后左右轻轻转动，促其充分混匀。 A B 　　记录受检者红细胞凝集情况，根据ABO血型鉴定表，判断受检者的血型。 　　　 实验结果 结论 抗A血清 抗B血清 + + + - - + - - 4.实验结果 玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内！ (二)志贺杆菌玻片凝集实验 1. 材料 志贺杆菌诊断血清(已知抗体)； 待鉴定细菌 2 .原理(玻片凝集) 将已知抗体直接与未知抗原物质（如细菌）混合，在电解质存在条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性，可判断细菌种类。 生理盐水 志贺诊断血清 + + 待检菌 待检菌 2人一个玻片 3.实验方法 混匀 4.注意事项： （1）生理盐水、诊断血清要适量； （2）待检菌为肠道致病菌，注意无菌操作， 玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内； （3）用接种环取待检菌时，不要挑取琼脂； 待检菌与生理盐水、诊断血清混匀时， 不要涂得太宽，否则影响结果观察。 3.实验方法 现象 结论 待检菌 待检菌 实验内容 +