8-第十三章 色谱仪的使用和维护.pdfVIP

第十三章 色谱仪的使用和维护 主要内容： 流动相 样品 手动进样阀 系统 流动相 要求 色谱柱对流动相的要求 与检测器匹配 脱气 避免卤素离子（不锈钢系统） 溶剂的黏度 防止细菌的生长 流动相 脱气 目的 色谱泵输液准确 输液均匀准确，脉动减少，保留时间和峰面积重现性提高 提高检测性能 防治气泡引起尖蜂，基线稳定，信燥比增加，溶剂紫外本底降低 保护色谱柱 减少死体积，防止填料氧化 方式 加热：简单，效果好，但容易造成流动相组成变化 抽真空：简单，效果较好。推荐设备：溶剂脱气机 超声波：简单，但效果不理想。推荐设备：超声波清洗仪 通惰性气（氦气）：可保持连续脱气，多用于低压梯度，费用较高 在线脱气机：可保持连续脱气，多用于低压梯度，只需一次性投资 流动相 更换 第一次启动泵用甲醇冲洗系统，停用，甲醇充满，以防长菌 更换新的流动相，用与两种流动相都互溶的溶剂做过渡，同 时注意流动相别毁坏色谱柱 使用过滤的、脱气的流动相，不使用放置过久的蒸馏水，可 -4-10-3M 的叠氮化纳 加入10 梯度洗脱时，最好使用粘度相同或相近的溶剂组成流动相 储液瓶中流动相的液位至少要高出流动相入口处10cm，防 止气泡进入溶剂中 样品 要求 除去微粒和杂质 了解样品在流动相中的溶解度。如果样品的溶剂不是流动 相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出 了解样品与色谱柱的基质、填料是否相互作用 避免超负荷进样,对250 ×4. 6 mm 的柱子,绝对进样量应不 超过100μg 。在灵敏度允许的前提下,应尽量将试样浓度降低, 减少绝对进样量(进样体积可保持不变) ,这是保持HPLC 柱性 能持久良好的重要举措之一。 手动进样阀 进样前，使用阀附带的冲洗附件对进样阀入口进行冲洗， 切换Load 和Inject 档位反复冲洗 如果是梯度洗脱方式，让进样阀保持在Inject位置，到下次 进样前1~2分钟切换回Load位置，将进样器从进样阀中拔出 进样时确保进样针中无气泡，进样时样品的浓度应从低到 高，如果进样顺序是样品的浓度从高到低，在下次进样前应 用流动相彻底清洗进样阀和进样器 要使用专用的液相平头注射器进样，绝对不可以用气相的 注射器 扳动手动进样阀时速度要快，否则容易引起局部压力过高， 损坏阀 系统 如果流动相的水相中含有无机盐时，建议使用“柱塞杆的在线冲洗装置” 。在关闭系统之前应用CH OH—H O(20:80)继续冲洗系统30min，以便除去色 3 2 谱柱中的无机盐。最后再用甲醇或乙腈冲洗系统10min。 使用过程中，要注意观察在线过滤器、单向阀、手动进样阀、色谱柱等一 些重要部件的功能是否正常，如果出现故障，应及时排除。主要是观察各接 口处是否有漏液、检测器的出口是否有持续的液滴滴出，压力是否稳定。 单向阀功能的检查方法 在在线过滤器中人为地引入气泡，将流量设定为1.0ml/min，然后观察气泡 在聚四氟乙烯管中的运动状态：如果气泡是平稳的上升，说明两个单相阀的 功能都是正常的，如果气泡是上去了而后又下来了，说明吸入阀出现了故障 ，如果气泡静止不动或缓慢上升，说明排出阀出现了故障。