CM-Dil标记大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性探讨.doc

CM-Dil标记大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性探讨 张雅妮1，于美娟2，冯善伟2，王淑辉2，李美山2，熊 符2，张 成2(1广州市妇女儿童医疗中心小儿神经科， 广东省广州市 510623；2中山大学附属第一医院神经科，广东省广州市 510080) 引用本文：张雅妮，于美娟，冯善伟，王淑辉，李美山，熊符，张成. CM-Dil标记大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性探讨[J].中国组织工程研究，2016，20(45):6726-6732. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.45.006 ORCID: 0000-0001-6404-6524(张雅妮) 文章快速阅读： 文题释义： 细胞标记：在多细胞系统中，为了追踪调查某特定细胞(群)的作用和行为，把作为对象的细胞(群)加以标记。 CM-Dil：氯甲基-1，1’-双十八烷基-3，3，3’，3’ -四甲基-吲哚-羰花青-高氯酸盐(Chloromethylbenzamido derivatives of 1，1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindo- carbocyanine perchlorate)是一种亲脂性荧光染料，易嵌入生物质膜内并在膜内作侧向扩散运动，从而标记整个细胞。无细胞毒性，不影响细胞的存活、生长，在标记细胞内消失慢，而且不会扩散到其它未标记细胞。在标记后不会影响其荧光，适合长期观察追踪。 摘要 背景：目前已有部分实验采用CM-Dil标记间充质干细胞开展体内外实验，取得良好成果。 目的：观察CM-Dil标记大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性及其定向迁移能力。 方法：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，通过流式细胞技术分析其特异性细胞表面标记抗原(CD29，CD44，CD11b，CD45)的表达。用CM-Dil标记大鼠骨髓间充质干细胞，继续培养细胞，观察细胞的形态及增殖情况，及传代后荧光的强度与持久性。采用Transwell小室进行标记后大鼠骨髓间充质干细胞向mdx鼠腓肠肌匀浆液的迁移实验。 结果与结论：所培养细胞均一性好，均表达CD29和CD44，不表达CD11b和CD45，符合骨髓间充质干细胞的特点。经CM-Dil标记后对大鼠骨髓间充质干细胞的形态、增殖无明显影响，传代后仍可保持荧光强度，但随传代有所减弱。标记前后大鼠骨髓间充质干细胞的迁移能力无显著性差异(P 0.05)。结果说明，CM-Dil标记过程安全、简单、高效，对大鼠骨髓间充质干细胞的形态、增殖及迁移能力无明显影响，体外细胞传代后仍可保持荧光，是大鼠骨髓间充质干细胞标记与示踪的理想试剂。 关键词： 干细胞；骨髓干细胞；细胞标记；CM-Dil；假肥大型肌营养不良；大鼠；骨髓；间充质干细胞；生物学特性；迁移；mdx；Transwel；国家自然科学基金 主题词： 干细胞；骨髓；细胞增殖；组织工程 基金资助： 国家自然科学基金；广东省科技计划项目(2011A030400006) Effect of CM-Dil labeling on biological characteristics of rat bone marrow mesenchymal stem cells Zhang Ya-ni1, Yu Mei-juan2, Feng Shan-wei2, Wang Shu-hui2, Li Mei-shan2, Xiong Fu2, Zhang Cheng2 (1Department of Pediatric Neurology, Guangzhou Women and Children’s Medical Center, Guangzhou 510623, Guangdong Province, China; 2Department of Neurology, First Hospital of Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China) Abstract BACKGROUND: Existing evidence has shown that CM-Dil-labeled mesenchymal stem cells have delivered better results in experiments in vivo and in vitro. OBJECTIVE: To investigate the effect of in vitro CM-Dil labeling on biological characteristics and directed migration of rat bone mar