天然抗肿瘤药物筛选方法的进展.doc

天然抗肿瘤药物筛选方法的研究进展 前言 肿瘤是严重威胁人类生命的常见病、多发病，其死亡率仅次于心血管疾病而列居第二，并且其发病率还在持续上升[1]。目前，临床上常用的化疗药物有 40余种，在肿瘤治疗中发挥着重要作用，但也面临着严峻挑战，如许多实体瘤尚无有效的药物，肿瘤的抗药性及抗癌药物严重的毒副反应等问题。因此，寻找和开发新的高效、低毒的抗肿瘤药物是医学界重要的研究课题[2]。大量的研究工作表明，天然产物来源的抗肿瘤药物毒副作用小，并且从天然产物中筛选抗肿瘤药物的概率比合成药高得多, 由于天然药物具有化学合成药无法比拟的优越性，越来越受到人们的青睐。TT或XTT产生一种衍生物，其颜色强度与活细胞数成正比，且可用自动分光光度计连续记数；第二种方法是应用蛋白染料sulforhodamine B，颜色强度也与活细胞数成正比[4]。细胞水平的药物筛选模型具有材料用量少、耗时短、成本低和大规模筛选等优点，但容易出现假阳性结果，并且不能判断药物的组织特异性[5]。 2.基于肿瘤的产生机理筛选抗肿瘤药物 肿瘤(癌症)并不是一种疾病，而是临床病理表现不同、预后各不相同的多种疾病的组合，其病因及发病机制极为复杂，肿瘤的发生是一个多因素、多基因突变、多步骤、长时间逐渐演化的过程[6]。现代肿瘤分子学的发展使肿瘤发病机理正在逐步阐明，机理抗肿瘤筛趋势已形成L。金艳书[10]等发现，苦参碱可将人肝癌细胞周期阻滞在G0/G1 期，诱导人肝癌细胞发生凋亡，从而发挥其抗肝癌作用。从金丝马尾连提取的生物碱碱甲hemanzine（2）在体外对各种癌细胞有明显的抑制作用，其IC50 在0.5-1μg/L之间，可阻断G1期细胞向 S 期过渡, 其杀细胞作用有细胞周期特异性。槲皮素（3）近年来也被发现具有细胞周期抑制作用。刘丽娟[11]等发现槲皮素能抑制白血病肿瘤细胞HL-60的生长，IC50为10 mmol/L。它能将细胞周期阻断在G2/M 期，并且这种阻断作用可以随着从培养基中移去槲皮素而发生逆转。崔燎[12]等人从凤尾蕨科植物半边旗(Pterissemipinnata) 中得到新化合物 F-A（4），用其对 HL-60和K562细胞作用24 h后，对两细胞株的IC50值分别为7. 6 mg/L和9. 1 mg /L，进一步研究发现该化合物有 G2/ M 期阻滞作用。 （1） （2） （3） （4） 2.1.2抑制拓扑异构酶的活性 DNA 拓扑异构酶是一种调节 DNA 空间构型的重要核酶，与DNA 的复制、转录、重组等密切相关，根据其断裂 DNA 单、双链的不同，又分为TOPOⅠ和Ⅱ。由于 DNA 的超螺旋程度影响着机体的活动，而拓扑异构酶的作用正是调控 DNA 的空间构型，于是 DNA 拓扑异构酶顺理成章的成为抗肿瘤药物作用的重要靶点[13]。研究表明，许多天然产物正是以拓扑异构酶为作用靶点，通过影响拓扑酶的活性，干扰 DNA复制及基因的表达进而发挥抗肿瘤作用。 Itoh[14]等对从印度萝芙木 (Rauwolfia serpentina Benth)中分离得到的 27个化合物进行了TopoⅠ和Ⅱ抑制活性研究，测试结果显示，化合物（5）具有明显的 TopoⅠ和Ⅱ抑制活性，并且对人白血病细胞株 HL-60也具有较强的抑制作用，IC50为67μmol/L。Clericuzio[15]等对 Leucopaxillus gentianeus的提取物进行 TopoⅠ抑制活性测试，研究发现7个类似葫芦素的化合物均有活性，这些葫芦素类似物具有很强的活性，其中化合物（6）对 NCI-H460肿瘤细胞的活性更是达到了0.011mg/L 与拓扑替康 ( topotecan) 相当。从 Amphimedon 海绵中分离得到的pyridoacridine类化合物（7）具有抑制 TopoⅠ和Ⅱ的活性，并可以选择性稳定DNA-拓扑异构酶Ⅰ可裂解复合物。在体外该化合物对多种肿瘤细胞株生长有明显抑制作用，其中对黑色素瘤细胞株 SK-mel-5的活性最强， IC50为130 nmol /L[16]。有文献报道，从云南省真菌-地花菌 ( Albatrellus confluens) 中提取分离到的Albaconol（8）对多种肿瘤细胞生长的平均 IC50值在 1.04~2.42μg/ ml 之间，且能明显抑制小鼠肝癌H22和小鼠肉瘤 S180的生长。刘明华[13]等后来研究发现 Albaconol 的细胞毒活性与其抑制 TOPOⅡ 的活性有关。 （5） （6） （7） （8） 2.1.3抑制端粒酶活性 端粒酶是位于细胞核内的一种逆转录酶，由hTR (端粒酶 RNA)、hTP1 (端粒酶相关蛋白1)和hTERT (端粒酶逆转录酶)三部分构成[17]。端粒酶在肿瘤发