流动注射化学发光联用技术讲义.pdfVIP

实验2、流动注射-化学发光联用技术用于药片中的盐 酸环丙沙星含量的研究 [ 验目的] 1 掌握流动注射技术的基本原理以及化学发光分析法的基本原理 2 熟悉流动注射-化学发光分析系统的工作原理及仪器使用方法 3. 掌握流动注射化学发光法测量盐酸药片中盐酸环丙沙星含量的方法。 [ 验原理] 化学发光(chemiluminescence)是指某些化学反应中发出可见光的现象。其发 光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物，中间体或者荧光物质吸收了 反应释放的能量而由基态跃迁至激发态，然后从激发态回到基态，同时将能量以 光辐射的形式释放出来，产 化学发光。 图1 化学发光发 的反应过程 直接化学发光 间接化学发光 流动注射技术（Flow Injection ）：原始的手工操作和现代化的检测仪器共存， 严重阻碍了先进检测仪器更好的发挥作用；同时分析过程中的试验处理往往占去 整个分析时间的90%，这种状况自然不能满足现代分析化学的要求。流动注射法 是为解决这一矛盾在70 年代中期出现的溶液处理技术的新观念。其主要特点包 括：①广泛的适应性：可与多种检测手段联用；②高效率：100-300 样/h ，复杂 的分析过程也能达到40-60 样/h; ③低消耗：10-100L/测定；④高精度：0.5% - 1 %RSD,复杂的在线处理，测定精度可达1.5%-3%RSD ；⑤设备简单、价廉。 流动注射分析装置包括：液体传输设备；注样器；反应器；流通式检测器和 信号读出装置。液体传输设备主要指蠕动泵；注样器是十六通注样阀；化学发光 检测的反应器和流通式检测器合并为流通式盘管。 盐酸环丙沙星属于第三代喹诺酮类药物，抗菌能力强，临床广泛用于革兰氏 阳性菌和革兰氏阴菌引起的感染，对 内酰胺抗 素、氨基糖苷类以及四环素等 多重耐药菌具有较好的抗菌活性。测定盐酸环丙沙星的分析方法主要有高效液相 色谱法、毛细管电泳法、分光光度法 、电位法嘲、极谱法等。研究表明：在酸 性条件下，盐酸环丙沙星对Ce4+-Na SO 化学发光体系具有强的增敏作用，据此 2 3 建立了盐酸环丙沙星的流动注射分析法。本方法具有分析速度快，仪器设备简单， 灵敏度高等优点。用于药片中盐酸环丙沙星含量的测定，加标回收结果令人满意。 [仪器试剂] BPCL 微弱发光测量仪 （中国科学院 物物理研究所）；HL-2D 恒流泵（ 海青浦沪西仪器厂）；八通阀（杭州）；联机计算机。 -4 硫酸铈溶液：4.0 10 mol/L （用0.05 mol/l 硫酸溶解）；亚硫酸钠溶液：8.0 -2 10 mol/l ；盐酸环丙沙星标准溶液：100.0 mg/L(用0.04 mol/l 盐酸溶解) ；盐酸环 丙沙星滴眼液 （规格及产家待定） 所用试剂均为分析纯，所用水为二次蒸馏水。 [装置和流路] 图1 流动注射-化学发光系统示意图 Figure 1 Diagram of Flow-inj ection -chemluminescence system P. ; V. ; F. ; M. 混合三通(mixture); W. 废 液(waste); PMT. ; HV. 负高压(high voltage); PC. 联机电脑 (personal computer) 。 a: ; b: ; c: [ 验步骤] 1. 仪器预热 (1)接通计算机电源，启动windows 系统；打开BPCL主机电源，仪器预热30min 以 ，选择所需温度及负高压。打开快门（探测器样品室又下方旋钮：指示柄端 头位于红色标记处，快门打开；绿色标记处，快门关闭）不能使探测器顶盖和快 门同时处于开启状态，否则会损坏探测器中光电转换器！开启BPCL测量程序， 设定参数后启动测量。 (2)清洗流路：开启蠕动泵，旋紧蠕动泵上面及两