表达人骨形成蛋白4的非复制型腺病毒的构建及鉴定.pdfVIP

, 2007, . 21, . 4 3·96 · Ch inese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery A p ril V o l N o 表达人骨形成蛋白4 的非复制型腺病毒的构建与鉴定 1# 1 1 1 1 1 2 王兴宇 　汪春兰 　赵宇 　王帮河 　姚远 　朱华锋 　何金生 　　【摘　要】　　 目的　构建含有人骨形成蛋白4 (hum an bone mo rphogenetic p ro tein 4, hBM P 4) 的非复制型腺病毒表 达载体 4 并检测其表达。　方法　酶切质粒 2 (+ ) 4 获得 目的基因片段, 克隆至真核表达载体 pA dE hBM P pCS hBM P 3. 1 (+ ) , 再亚克隆至 , 电转化至含有 1 骨架质粒的 . 5183 中进行同源重组, 重 pcDNA pShuttle CM V pA dEasy E co li BJ p 组质粒转染H EK293 细胞包装成含有hBM P 4 基因的非复制型腺病毒。病毒颗粒感染H EK293 和H eL a 细胞, 提取总 和总蛋白, 进行 和 检测。　结果　获得了含有 目的基因 4 的非复制型腺病毒表达载 RNA R T PCR W estern blo t hBM P 体 4, 酶切鉴定提示构建正确, 检测到 4 基因的转录, 检测到 4 蛋白表 pA dE hBM P R T PCR hBM P W estern blo t hBM P 达。　结论　将 目的基因hBM P 4 克隆至非复制型腺病毒表达载体中, 为进一步研究其在基因治疗骨缺损中的应用奠定 基础。 【关键词】　　骨形成蛋白4　　非复制型腺病毒　　基因治疗 中图分类号: 78　 813　　文献标识码: R Q A - CONSTRUCTION AND ID ENTIF ICATION OF REPL ICATION D EFECTIVE RECOM B INANT AD INOV IRUS 4 , , , .