6 血红蛋白的提取与分离 vera.pptVIP

步骤 操作要求 ① ② ③ ④ ⑤ 立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡12h 洗涤平衡 一次性缓慢倒入；轻轻敲打 装填悬浮液 凝胶颗粒＋蒸馏水→充分溶胀 根据色谱柱体积计算凝胶用量 色谱柱垂直固定在支架上 配制悬浮液 计算称量凝胶 固定色谱柱 材料：交联葡聚糖凝胶G-75 20mmol/L磷酸缓冲液 “G”表示什么？75代表什么？ 2、凝胶色谱柱的装填 2.凝胶色谱制作 1）凝胶色谱柱的制作 ①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。 ②底塞的制作：打孔 挖出凹穴 安装移液管头部 覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。a、选择合适的的橡皮塞，中间打孔；b、在橡皮塞顶部切出锅底状的（ ），在0.5ml的（ ）头部切下（ ）长的一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超过橡皮塞的凹穴底面。 凹穴 移液管 5cm 底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。 c.剪尼龙网小圆片覆盖在（ ）上，用（ ）的尼龙纱将橡皮塞（ ）包好，插到玻璃管一端。 d、色谱柱下端用移液头部做（ ），连接一细的（ ），并用螺旋夹控制尼龙管的（ ），另一端放入收集（ ）的收集器内