遗传学实验― 果蝇实验.pdfVIP

遗N HFREDITA‘S(Beijing) s(1）：36-381981 电子显微镜术在遗传工程上的应用 孙 纪 申 （中旧医学科学院分院，四川简阳） 人类对核酸的认识，是与生产和科学的发 四乙酸二钠一整个溶液的pH为7.50 展分不开的，由于遗传学和生物化学等技术的 下相溶液 经常使用的下相溶液为燕馏 进展，从而积累了大量的资料，确定了各种遗传 水或0.1-0.5克分子醋酸按溶液，下相溶液的 活性物质的存在。在电子显微镜制出之前，人 酷酸按浓度总比展开溶液为低。 Westmoceland 们利用光学显微镜只能在细胞水平上观察到染 等首先报道使用甲酚胺的盐溶液作为下相溶 色体。在电子显微镜制出之后，已能直接观察 液，它能使单链 DNA也呈弯曲的线状 同时还 到原核和真核生物的遗传活性物质的超显微结 能增加样品的反差。 构，因此电子显微镜技术可用于遗传工程研究。 2．扩散法[91［ 所谓扩散法是将核酸配制 一（）电子显微镜标本的制作法 在下相溶液中，展开溶液与下相溶液的其它成 通过蛋白单分子层技术，可以观察核酸大 分则与展开法相同。在单分子膜形成后，核酸分 分子 包（括载体 DNA和外源 DNA等）。 子由于扩散而被吸附到膜的下表面。扩散法具 1．展开法[31 取直径为9厘米 的玻皿， 有核酸浓度低 一（般为0.01一。.05微克／毫升） 用洗液充分洗涤干净后，加入下相溶液25毫 和对核酸分子的构型影响小的优点。扩散法适 升，在溶液表面喷上极少量的滑石粉。取载玻 用于链较短的DNA分子或 RNA分子，长链的 片经洗液及蒸馏水充分洗涤后 不（能与手指接 DNA分子不易扩散，需要的时间较长。 触），斜放于玻皿的一边上，一端浸入下相溶液 LangD.等(1970）及工一Y)v－一 }y充 其（倾斜角以 15。左右为宜）。用毛细滴管或微 子 （1974）采用了微量法。将40微升的含有核 量注射器吸取展开液，在接近下相溶液表面 1 酸 浓（度为 10-3-10-”微克）、细胞色素c浓（ 厘米左右的载玻片上轻轻滴一滴，徐徐下流。当 度为1.3微克／毫升）、甲醛 浓（度为0.2%）的醋 接触下相溶液表面时。很快扩展成单分子层，并 酸钱溶液，直接滴于聚四氟乙烯板上，待一定时 把滑石粉推向四周。所有过程均在室温下进行 间后，细胞色素C在液滴的表面形成单分子膜， 约（200C)o静置1-2分钟，用火棉胶及碳膜制 再用带有支持膜的铜网直接覆盖于液滴上面以 成的铜网蘸取，分别在无水酒精中浸2次，每次 转移该膜。实验证明，如果在2分钟内即进行 10-20秒，以除去支持膜上的多余液体，待干 转移，则由于单分子膜尚未很好形成，因而核酸 （或用2多醋酸双氧铀酒精溶液染色脱水30秒 分子未能吸附。在斗分钟至5小时内，核酸分 钟，或用无水酒精脱水后，再用饿酸蒸气薰）。 子在膜上的吸附浓度与 时（间）“成正比，。二 展开溶液 很多球状碱性蛋白均有展开 0.750 成单分子膜的活性，如细胞色素C，其浓度为 3一 步释放法 一步释放法是利用展开 0.1-0.2毫克／毫升。核酸浓度在 0.5-2微克 ／ 溶液和下相溶液间盐浓度的巨大差异，从而产 毫升之间。溶剂为挥发性的醋酸按溶液，浓度 SunJish。二：ApIilicationofElectron Mieroscorpto 为 0.5--1克分子，并含有 1毫克分子的乙二胺 GeneticEnginneering 36 生渗透压的变化，或使用蛋白质变性剂，在蛋白 子量为 2.13X 106道尔顿。 质单分子膜的展开形成过程中，同时使核酸直 此外，在观察某一核酸分子时，可以在制剂 接从病毒、噬菌体、细菌或含有核酸的细胞器中 中同时加人另一已知形态及长度的单链或双链 释放出来，从而简化了核酸的分离提纯工作，〔，。 核酸分子作比较。例如。已知噬菌体 ,Ax的R