第九章 fehling procedure‘s error.docVIP

斐林试剂法测定还原糖的误差分析 史建国 杨俊慧 马耀宏 张利群 （山东省科学院中日友好生物技术研究中心　济南 250014） 摘要： 本研究根据斐林试剂测定还原糖的基本原理，采用自动控制系统调整反应条件，定量分析了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响。 关键词：还原糖　斐林试剂　自动滴定仪 　 还原糖是谷氨酸发酵生产中重要的生化控制指标，如何快速而准确地测定还原糖是各生产厂家普遍关心的问题。目前，我国谷氨酸生产企业主要采用斐林试剂测定法。由于该法在实际测定过程中易受很多因素的干扰，严重影响测定的准确性［１］。而不同的操作人员控制反应条件的技术不同，测定误差较大，给生产过程控制和产品质量检验带来很多麻烦，严重影响了生产技术水平的提高。本文主要研究了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响，确定了误差来源。为正确掌握斐林试剂滴定法，提高测定的准确度，提供了新的依据。 １试剂与仪器 1.1 　试剂配制 1.1.1　斐林甲液：称取35g硫酸铜（CuSO4·5H2O），取1%次甲基蓝 溶液5mL，用水共容后定容至1000mL。 1.1.2　斐林乙液：称取117g酒石酸钾钠，126.4g氢氧化钠 ，9.4g亚铁氰化钾，用水共容后定容至1000mL。 1０％标准葡萄糖溶液：精确称取100g分析纯葡萄糖（105℃ 干燥2h，恒重），加水溶解，并加10 mL分析纯盐酸，定容至　1000mL。 1.0%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液100mL， 加水稀释定容至1000mL。 　 1.1.5 0.1%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液10mL，加水稀释定容至1000mL。 1.2　仪器设备 全自动测定仪（山东省科学院中日友好生物技术研究中心研制生产）：按实验要求分别调整加热温度、加热时间、滴定速度、搅拌力度。 2　测定方法 2.1开机：按动开/关键、仪器自动清洗一次，开机完成。 2.2定标：按定标键。 用微量进样器注入1.0%的标准葡萄糖液100uL，用0.1%的葡萄糖标准液进行滴定。反应完成后，仪器显示和打印定标结果。 2.3　样品测定 （1）被测样品为1.0%的葡萄糖标准液。 （2）按分析键， 用微量进样器注入100uL 1.0%的标准葡萄糖液，用 0.1%的葡萄糖标准液进行滴定。 （3）反应完成后，仪器显示并打印测定结果。 2.4 结果计算 该反应系统中，滴定反应达到终点所需糖的总体积为10ml（按0.1%的葡萄糖计算）。 相对结果（被测糖体积）= 糖总体积（10mL） — 滴定糖体积 （2）仪器设定标准测定值为1.0% 。其它测定值是标准值的校正值。 测定值（%） = 校正系数 × 相对结果（被测糖体积） 校正系数 = 1.0（%） / 定标时被测糖体积 3　结果与分析 3.1　加热温度对测定结果的影响 　斐林试剂中滴定终点指示剂次甲基蓝在氧化状态下呈蓝色，还原状态下呈无色［２］。反应液中溶解氧含量的高低直接影响次甲基蓝的颜色变化，干扰滴定终点的确定。反应液的温度与溶解氧的含量有直接的关系 。温度越高，溶解氧含量越低。因此温度的变化对测定的结果有很大的影响。 本研究在反应温度100℃的条件下，用1.0%的葡萄糖标准液定标，研究不同的温度下对还原糖测定的影响结果见表1。可见温度越高，测定结果越高，从66—100℃，测定结果相差近8倍。60℃以下则没有反应终点显示。本仪器采用高精度传感器控制恒定的反应温度，最大限度地降低了温度变化对测定产生的影响。 表１　　加热温度对测定的影响 反应温度（℃） 滴定糖体积（mL） 相对结果 (mL) 测定值 （%） 100 1.56 8.44 1.0 92-98 2.46 7.54 0.89 85-90 2.8 7.2 0.85 78-82 3.99 6.01 0.71 75-78 5.2 4.8 0.57 69-72 6.74 3.26 0.39 66-69 8.89 1.11 0.13 60-63 — — — ３.２　加热时间对测定结果的影响 　　手工滴定时，首先将试剂加热到１００℃，然后开始用标准葡萄糖进行滴定。从温度升高至１００℃到开始滴定，这段间隔时间（持续沸腾加热时间）的不同可引起测定误差。在没有间隔时间的条件下，用1.0%的葡萄糖标准液定标，研究不同间隔时间对测定结果的影响（见表２）。结果表明：开始滴定前（间隔时间）长，消耗标准滴定糖液少，测定结果偏高。在１分钟内测定的最大误差可达１２％左右。 表２加热时间对测定的影响 间隔时间（s） 0 10 20 30 40 50 60 滴定糖 体积（mL） 3.86 3.77 3.59 3.49 3.3