3.6微生物药物的分离精制鉴别.ppt

第三节 微生物制药 六、微生物药物的分离、精制和鉴别 微生物药物分离纯化的重要原则 考虑使用高选择性的分离纯化方法，保证产品要求的纯度； 考虑不影响产品的生物活性； 获得的最终产品必须达到或超过国家药典（或出口国）的质量标准。 1、提取的过程和原则 提取的3个阶段： 发酵液的预处理和固液分离 提取（分离浓缩） 精制（纯化） 发酵液的预处理和固液分离 目的：达到固液分离 根据活性物质的许可范围，可以采取酸化、加热、过滤、絮凝、离心等方法。 提取（分离浓缩） 对活性物质的浓缩 方法：化学萃取，树脂吸附，沉淀等 精制（纯化） 获得活性物质的纯品 方法：沉淀，吸附，结晶，脱色，色谱层析等。 分离提取的原则： 操作时间应尽可能的短； 操作温度一般要低； 分离纯化操作应在药物性质许可的pH 范围内； 经常清洗消毒，避免杂菌的污染； 如果是注射用药物，精制和成品阶段应保证无菌操作。 2、提取纯化的基本方法 吸附法 沉淀法 溶剂萃取法 离子交换法 吸附法 利用适当的吸附剂（如活性炭、白土、氧化铝等），在一定的pH条件下，使发酵液中的目的产物被吸附，然后改变pH，以适当的洗脱剂（一般为有机溶剂）将产物洗下。 早期的青霉素、链霉素及目前的丝裂霉素、放线菌酮等药品的分离提取主要采用吸附法。 操作简单，成本较低，但吸附性能不稳定，使用大量有机溶剂影响环境。 发展趋势——应用和开发新型大孔吸附树脂。 吸附法 大网格树脂是一种非离子性吸附剂，具有选择性好、解吸容易、树脂性能稳定、机械强度好、可反复使用等优点。 非极性——从极性溶液中吸附非极性物质 极性 ——从非极性溶液中吸附极性物质 中等极性——均具有吸附能力 沉淀法 利用某些微生物代谢产物的两性性质，使其在等电点时沉淀，或在一定pH条件下，与酸碱盐形成不溶性或几乎不溶的复盐。如四环素类药物的提取。 设备简单，成本低，收率高。但不是所有的药物都可以使用沉淀法提取的，且反应形成的沉淀物过滤困难。实际操作中常与溶剂萃取法结合使用。 溶剂萃取法 利用微生物药物在水和与水不互溶的有机溶剂中的溶解性的差异，将药物从一种液体转移到另一种液体中，从而达到浓缩和提纯的目的，如目前的青霉素提取。 产品的浓缩倍数大，产物纯度高，操作周期短，可以连续生产。但对设备的要求较高，大量消耗有机溶剂，污染环境。 青霉素的提取及精制 青霉素：酸性化合物，酸性时为游离酸，易溶于有机溶剂。在pH7以上以盐状态存在，易溶于水。 红霉素的提取及精制 红霉素：碱性化合物，在碱性条件下溶于有机溶剂，在酸性时溶于水。 离子交换法 利用某些微生物药物能够解离成阴离子或阳离子的特性，通过离子交换树脂的选择性交换，实现产物的分离。如卡那霉素、庆大霉素是碱性化合物，可以采用阳离子交换树脂来提取。 分离纯化的成本低，需要的设备简单，操作方便，使用的有机溶剂少，不污染环境。但工艺周期长，操作过程中pH变化大，很多微生物药物不能耐受。 链霉素的提取 链霉素是3价阳离子，具有很强的碱性，在碱性条件下不稳定。 3、微生物药物提取方法的选择 分离纯化方法的确定需要由小试决定。 具体实施时应考虑因素有： 产品的基本理化性能 化合物的稳定性 尽可能避免二次污染 4、微生物药物的鉴别 早期鉴别 最终鉴别和结构测定 （1）早期鉴别 微生物药物的提取方法及其溶解性，微生物药物本身的特异颜色，微生物药物对酸、碱、温度、光线的稳定性等都可以作为微生物药物鉴别用的一个“指纹”。 （2）微生物药物的快速、准确鉴别 LC-UV（液相色谱-紫外光谱联用技术） LC-MS（液相色谱-质谱联用技术） LC-IR（液相色谱-红外联用技术） LC-NMR（液相色谱-核磁共振技术） （3）微生物药物的结构鉴定 紫外光谱 红外光谱 核磁共振谱 质谱 十六元环大环内酯类抗生素的薄层色谱图 1 :乙酰螺旋霉素;2 :麦迪霉素;3 :麦白霉素; 4 :吉他霉素;5 :乙酰吉他霉素 碳谱与氢谱的对比 * * 一、微生物药物的几个相关基本概念 二、微生物药物的分类 三、微生物药物的应用 四、药源微生物及微生物药物的筛选技术 五、微生物药物的发酵生产技术 六、微生物药物的分离、精制和鉴别 七、废弃物的综合利用和环境保护 微生物药物的分离、精制和鉴别 1、发酵液的过滤和预处理 分离细胞、菌体和其它悬浮颗粒（细胞碎片、核酸和蛋白质的沉淀物）， 除去部分可溶性杂质和改变滤液的性质，以利于后继各步操作。 （1）发酵液中蛋白质的去除 pH的调节 采用加热使蛋白质变性 加入蛋白质沉淀剂和絮凝剂 在抗生素稳定性好时可采用较强的无机酸调节pH，一般采用较为缓和的有机酸，如草酸。 金属盐类：硫酸锌、硫酸 铝、氯化铝 水溶性高分子化合物：聚苯乙烯衍生物