铜绿假单胞菌外膜蛋白OprH原核表达载体的构建和表达.PDFVIP

中国烧伤创疡杂志２０１４年第２６卷第３期　 Ｔｈｅ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＢｕｒｎｓＷｏｕｎｄｓ ＆ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｕｌｃｅｒｓ２０１４ Ｖｏｌ２６ Ｎｏ３ ·１９５ · 创伤创面研究与治疗 Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｒａｕｍａｔｉｃ Ｗｏｕｎｄｓ 铜绿假单胞菌外膜蛋白ＯｐｒＨ原核表达载体的 构建与表达 ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔｏｒＥｎｃｏｄｉｎｇ Ｏｕｔｅｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＯｐｒＨ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ 罗晓庆　 孙济宇　 王　 慧　 王晓波　 王　 琪　 蒋瑞雪 ＬＵＯ Ｘｉａｏ⁃ｑｉｎｇ，ＳＵＮＪｉ⁃ｙｕ，ＷＡＮＧ Ｈｕｉ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ⁃ｂｏ，ＷＡＮＧ Ｑｉ，ＪＩＡＮＧ Ｒｕｉ⁃ｘｕｅ 基金项目： 齐齐哈尔市科技局指令性科研计划课题 （项目编号： ＳＦ⁃２０１１０６） 作者单位： １６１００６　 黑龙江　 齐齐哈尔， 齐齐哈尔医学院免疫教研室 （罗晓庆， 王慧， 王琪， 蒋瑞雪）； １６１０００　 黑龙江　 齐齐 哈尔， 齐齐哈尔医学院附属第三医院烧伤科 （孙济宇， 王晓波） Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｐｒｏｇｒａｍ：ＭａｎｄａｔｏｒｙＰｒｏｊｅｃｔｏｆＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒａｍｅｏｆ ＱｉｑｉｈａｒＳｃｉｅｎｃｅ＆ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＢｕｒｅａｕ （ＰｒｏｊｅｃｔＣｏｄｅ：ＳＦ⁃２０１１０６） Ａｆｆｉｌｉａｔｉｏｎｓ： Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｑｉｑｉｈａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｑｉｑｉｈａｒ，１６１００６ Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ （ＬＵＯ Ｘｉａｏ⁃ｑｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｈｕｉ，ＷＡＮＧ Ｑｉ，ＪＩＡＮＧ Ｒｕｉ⁃ｘｕｅ）； Ｂｕｒｎｓ Ｓｕｒｇｅｒｙ，ＴｈｅＴｈｉｒｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌｏｆ Ｑｉｑｉｈａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｑｉｑｉｈａｒ，１６１０００ Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ （ＳＵＮＪｉ⁃ｙｕ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ⁃ｂｏ） 【摘要】 　 目的　 克隆铜绿假单胞菌外膜蛋白ＯｐｒＨ基因， 构建其原核表达载体并鉴定其表达。 方法　 从铜 绿假单胞菌中提取基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增ＯｐｒＨ基因； 采用Ｔ⁃Ａ克隆技术构建ｐＭＤ１９Ｔ⁃ＯｐｒＨ重组质粒， 并经 酶切和序列测定后， 获得ＯｐｒＨ片段插入到原核表达载体ｐＥＴ２８ｂ 中， 以构建ｐＥＴ２８ｂ⁃ＯｐｒＨ重组表达质粒， 并在 表达宿主菌ＥＣｏｌｉ ＢＬ２１中经ＩＰＴＧ诱导表达及通过ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ 电泳鉴定。 结果　 ｐＥＴ２８ｂ⁃ＯｐｒＨ原核表达载体构建 成功； 重组表达质粒经ＩＰＴＧ诱导后表达外膜蛋白ＯｐｒＨ。 结论　 成功克隆了ＯｐｒＨ基因并获得原核表达物， 为进 一步研究快速检测该菌的方法奠定了基础。 【关键词】 　 铜绿假单胞菌； 外膜蛋白； 原核表达载体； 重组质粒 【标志符】 　 ｄｏｉ： １０３９６９／ｊｉｓｓｎ１００１⁃０７２６２０１４０３００６ 【文章类型】 　 基础研究 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏ ｃｌｏｎｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｏｆ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ＯｐｒＨ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ （ ＰＡ） ， ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ａ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ． Ｍｅｔｈｏｄ　 Ｔｈｅ ＤＮＡ ｇｅｎｏｍｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ＰＡ， ｔｈｅ Ｏ