人乳头瘤病毒16型L2E7融合蛋白优化表达、制.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 姜云水 等/人乳头瘤病毒 16 型L2E7 融合蛋白的优化表达、制备及其对肿瘤生长的抑制作用 566 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn April 25, 2015, 31(4): 566−576 DOI: 10.13345/j.cjb.140390 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 16 L2E7 1 1 1 2 1 1 1 1 2 姜云水 ，李剑波 ，高孟 ，任皎 ，金素凤 ，陈刚 ，吴洁 ，庄昉成 ，田厚文 1 310052 2 102206 , , , . 16 L2E7 . , 2015, 31(4): 566–576. Jiang YS, Li JB, Gao M, et al. Optimized expression, preparation of human papillomavirus 16 L2E7 fusion protein and its inhibitory effect on tumor growth in mice. Chin J Biotech, 2015, 31(4): 566–576. 摘 要: 为提高人乳头瘤病毒 (HPV) 16 型治疗性融合蛋白疫苗HPV16 L2E7 在大肠杆菌中的表达量，根据大 肠杆菌偏爱密码子，对 HPV16 l2e7 基因进行密码子优化，优化后的基因分别插入到 pGEX-5X-1 、pQE30 和 pET41a 表达载体中，转化 JM109 、JM109 (DE3) 和 BL21 (DE3) 表达菌，筛选出高表达菌株 pET41a-HPV16sl2e7/BL21 (DE3) ，目的蛋白从占全菌蛋白的10%以下提高到约28% ，优化接种量、IPTG 浓度、 诱导温度和诱导时间，获得最佳表达条件；通过 15 L 发酵罐发酵，SP Sepharose Fast Flow 、Q Sepharose Fast Flow 和Superdex 200 pg 纯化及复性HPV16 L2E7 融合蛋白，制备的融合蛋白纯度可达95% 以上，经SDS、 Western blotting 鉴定证实，制备的HPV16 L2E7 蛋白加CpG 佐剂对小鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用，有 75% (6/8) 的小鼠不成瘤，为后续的疫苗产业化奠定基础。 : 人乳头瘤病毒 16 型，优化表达，发酵，纯化，宫颈癌，疫苗 Received: July 23, 2014; Accepted: September 22, 2014 Supported by: National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (No. 2006AA02Z490), Science and Technology Planning Project of Zhejiang Province (No. 2012F10005). Corresponding author: Fangcheng Zhuang. Tel/Fax: +86-571 E-mail: fczhuang@163.com Houwen Tian. Tel/Fax: +86-10 E-mail:houwent@126.com (863 ) (No. 2006AA02Z490) (No. 2012F10005) 2014-10-10 /kcms/doi/10.13345/j.cjb.140390.html 姜云水 等/人乳头瘤