2013DNA复制修复重组分子生物学.pptxVIP

DNA的复制 (DNA Replication) 遗传信息忠实地从 一代传递到下一代 Key Terms 复制子(Replicon); 复制叉(Replication fork); DNA的半保留复制 (Semi-conservative replication) DNA的半不连续复制(semi-discontinuous replication) 冈崎片断(Okazaki fragment); DNA聚合酶(DNA polymerase) • 生命的遗传是染色体DNA自我复制的结果; • 染色体DNA的自我复制主要是通过半保留复 制(Semi-conservative)来实现的，是一个以亲代 DNA分子为模板合成子代DNA链的过程。 DNA的复制 DNA的半保留复制 Semi-conservative mechanism 15N labeling experiment 1958年，Meselson 和Stahl研究了经 15N标记3个世代的大肠杆菌DNA, 首次证明了DNA的半保留复制。 DNA的半保留复制保证了 DNA在代谢上的稳定性，与 DNA的遗传功能相符合。 DNA在复制过程中，每条链 分别作为模板合成新链，产 生互补的两条链。这样新形 成的两个DNA分子与原来 DNA分子的碱基顺序完全一 样。因此，每个子代分子的 一条链来自亲代DNA，另一 条链则是新合成的，这种复 制方式被称为DNA的半保留 复制。 DNA的半保留复制 （semi-conservative replication 复制时，双链DNA要解开成 两股链分别进行，所以，复 制起点呈叉子形式，被称为 复制叉(Replication fork)。 复制叉 复制子 DNA的复制是由固定的起始点开始的。一般把生物体 的复制单位称为复制子(replicon) 。一个复制子只含一 个复制起点。 物种 细胞内复制子 数目（个） 平均长度/kb 复制子移动 速度-1(bp·min) 大肠杆 菌 1 4200 50000 酵母 500 40 3600 果蝇 3500 40 2600 蟾蜍 15000 200 500 蚕豆 35000 300 ？ 部分生物复制子的比较 • 细菌、病毒和线粒体的DNA分 子都是作为单个复制子完成复制 的； • 真核生物基因组可以同时在多 个复制起点上进行复制，也就是 说它们的基因组包含有多个复制 子。 Multiple eukaryotic replicons O1, O2, and O3 are replication origins, each serving a region called replicon (R1, R2, and R3). DNA replication involves unwinding of the double helix. Unwinding of a DNA molecule looks like a fork growing in one direction. The region being replicated looks like a bubble called the replication bubble (in red). Electron Microscopy of replicating DNA reveals replicating bubbles 早期果蝇胚胎中正在复制的DNA 原核生物DNA的复制 In 1963, John Cairns’ Technique: • Grew E. coli in 3H thymidine • Waited till cells were in the middle of replication • Lysed the cells very very gently • Spread the lysate on an EM grid • Exposed the grid to X-ray film for TWO months. Replication of the E. coli chromosome What Cairns’ experiment showed: • E. coli has a circular chromosome. • E. coli has a single origin of replication. • In E. coli, replication and unwinding a