同型半胱氨酸(HCY)检测试剂方法学比较精选.ppt

HCY生化检测试剂方法比较（如何区分两种方法学的试剂） 2016.06 提纲 目录 3 同型半胱氨酸（Hcy）简介 常用Hcy测定方法：直接法与间接法 直接法测定Hcy原理 直接法优点及如何区分两种方法学的试剂 间接法的缺陷 关于直接法试剂的几个问题 功能特点：Hcy是一个含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢的中间产物。 Hcy自发形成的巯基内酯化合物，可以和反式视黄酸共同引起血小板的凝集，与此同时，同型半胱氨酸巯基内酯还可引起血栓素（TXB2）的形成。 同型半胱氨酸巯基内酯，与低密度脂蛋白形成复合体，随后被巨噬细胞吞噬，形成泡沫细胞。促进血凝块的形成，从而引起临床上常见的梗塞性疾病。 同型半胱氨酸（Hcy）简介 同型半胱氨酸（Hcy）致血管病变机制 致血管内皮细胞损伤和功能异常 对血管平滑肌细胞(VSMCS)的影响 刺激血管平滑肌增殖 对凝血系统的影响 增加血液中血小板的黏附性 对血脂的影响 同型半胱氨酸（Hcy）简介 常用Hcy测定方法 参考文献：同型半胱氨酸检测技术的研究进展及评价；谭功军等，实用预防医学，2010，11（24）：2334-2337 常用方法 优缺点 色谱法： HPLC、GC-MS 具有很高的准确度和稳定性，缺点是处理标本的能力有限，临床实验室未配备设备及操作人员，常作为同型半胱氨酸检测的参考方法； 荧光偏振免疫检测（FPLA） 成本高，需专用仪器。 酶联免疫 灵敏度高特异性强，但精密度差，耗费人力，操作时间长，不适宜做单个标本和急诊标本。 化学发光 成本高，需专用仪器 循环酶法： 直接法、间接法 可在大型生化分析仪上使用，操作简单，结果准确可靠，且可和其他参数进行同时分析，目前最为常用的临床检测方法； 数据来源：www.kegg.jp 同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径： 直接法测定Hcy原理 直接法（水解酶法） 间接法（胱硫醚法） 直接法测定Hcy原理 ① ATP + L-methionine + H2O = phosphate + diphosphate + S-methyl-L-methionine ② S-methyl-L-methionine + L-homocysteine = L-methionine+S-adenosyl-L-homocysteine ③ S-adenosyl-L-homocysteine + H2O = L-homocysteine + adenosine ④ adenosine + H2O = inosine + NH3 ⑤ 2-oxoglutarate + NH3 + NADH+ H+= L-glutamate + H2O + NAD+ 直接法优点 目前国际市场上，能够在生化分析仪器上使用的Hcy试剂有两种，都是循环酶法。一种为直接法（水解酶循环酶法），另一种为间接法（胱硫醚循环酶法）。 水解酶循环酶法，该法特异性高、抗干扰力强、适用于各种生化仪，该类产品被国际大公司(如罗氏， 奥林帕斯等)广泛采用。 如何区分两种方法学的试剂 很多胱硫醚循环酶法的试剂其试剂比例也可以完全够模仿水解酶循环酶法试剂。有一个方法可以简易的区分两者： 胱硫醚循环酶法（简称间接法）：其试剂二（R2）是 淡黄色的！ 水解酶循环酶法（简称直接法）：其试剂二（R2）是 无色的！ 直接法优点 循环酶法 原理设计 1 3 2 4 干扰项目 直接法 间接法 市场选择 试剂性能 直接法优点 原理设计 胱硫醚循环酶法（简称间接法）的Hcy检测试剂在基本的设计上存在着问题，其检验是靠测量Hcy转化为β-胱硫醚时产生的胱硫醚，但是却不能够消除内生β-胱硫醚，而恰恰有很多人，尤其是肾脏疾病患者的内生β-胱硫醚水平非常高（可高达300μmol/L，大部份 20μmol/L)。间接法的Hcy试剂受到了内生胱硫醚的明显干扰。它测的是同型半胱氨酸(Hcy)与内源性胱硫醚的总和，因此被称为是很好的检测胱硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。 水解酶循环酶法（简称直接法）不受上述干扰。此项数据结果发表在AACC杂志上。这也是一些国际知名公司拒绝使用胱硫醚循环法Hcy试剂的原因。 直接法优点 原理设计 1、间接法存在内源性胱硫醚的假阳性干扰 罗氏和雅培公司的医学部检测专家甚至声称间接法试剂是很好的检测胱硫醚的试剂而非检测Hcy的试剂。 肾脏疾病非常普遍，如果有实验室想要使用间接法试剂来测试Hcy，那么他们将不得不同时进行肌酐的检测来确认实验的结果是Hcy的，而不是由于肾脏疾病而产生的胱硫醚的。 直接法优点 原理设计 2、间接法检测准确性及线性范围存在问题 间接