海洋生物学实验讲义(巩宁)剖析.doc

海洋生物学实验讲义 （环境科学与工程学院 海洋科学、海洋生物资源与环境专业） 巩宁 2011.10 一、本课程的性质和任务 海洋生物学是海洋科学重要的基础学科 二、课程简介 本课程是高等学校海洋科学、海洋生物资源与环境专业本科三年级的学位课——“海洋生物学”的实验环节。与理论课内容同时或在其后开设。通过实验使学生获得感性认识，深入理解和应用“海洋生物学”课程的概念、理论，并能灵活运用所学理论知识指导实验。培养学生仔细观察进而分析判断实验现象的能力，能正确诚实记录实验现象与结果；在分析实验结果的基础上，能正确地、独立地撰写实验报告；具有解决实际问题的实验思维能力和动手能力。通过实验掌握海洋生物活体标本和固定标本的制作和观察方法，能够识别常见的海洋生物并对其生态适应的原理和方法进行初步的分析。 目 录 实验一 海洋生物的显微镜观察 附 显微镜基本知识 4 实验二 10 实验三 15 实验四 19 实验五 23 实验六 25 实验七 27 实验八 33 实验九 36 实验十 海洋微生物宏基因组提取 39 附录 大连沿海常见底栖海藻蜡叶标本图片………….……………….42 实验一 海洋生物的显微镜观察 实验目的 1、了解普通光学显微镜的构造。 2、学习显微镜的正确使用维护。 3、学习海洋生物形态的观察方法。 材料和器具 1、显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、香柏油、二甲苯、吸水纸、吸管。 2、生物标本制片、海水水样 实验内容 （一）显微镜使用 1、取镜 打开镜箱、右手握住镜臂，取出显微镜，用左手托住镜座放于平稳的实验台上。镜检者姿势应端正，一般左眼观察，右眼便于绘图或记录。观察时两眼必须同时睁开，以减少疲劳。 2、调光 一般采用散射光，如光线弱时可用日光灯光作光源。 （1）将低倍镜转至镜筒下方，旋转粗调节器，使镜头与载玻台相距0.5cm。 （2）左眼看目镜，观察光源强弱，调节反光镜（一般用平面镜，若光线弱时可用凹面镜）、光圈与升降聚光镜使视野内光线均匀明亮。若用显微镜灯，则调节光源开关、光圈及升降聚光镜即可。 3、低倍镜观察 将待测标本置载物台上，用卡尺夹住，移动推动器，使观察标本处于物镜正下方。转动粗螺旋，使载物台上升（或镜筒下降）至距标本0.5cm处，由目镜观察，然后慢慢下降载物台（或上升镜筒）直至出现模糊像后，用细调节器调至物像清晰为止。 4、高倍镜观察 低倍镜观察至清晰物像后，将观察的部位移至视野中央，转换高低镜，然后用细调节器调至物像清晰。 5、油镜观察 （1）在玻片标本的镜检部位滴一滴香柏油，然后将油镜转至正下方 （2）小心上升镜台（或下降镜筒），从侧面注视镜头慢慢浸在香柏油中，几乎与标本相碰。应特别小心不能将油镜镜头压在标本上，更不能用力过猛以免压碎玻片或损坏镜头。 （3）显微镜复原 附 显微镜基本知识 显微镜是微生物研究的工具，显微镜种类繁多，有光学显微镜、相差、暗视野、荧光及电子显微镜等。但它们的原理和结构基本相同。下面以普通光学显微镜为例简要介绍其原理及结构。 （一）原理 一般显微镜的光学系统由两部分组成（图1-1） （1）成像系统由目镜（a）、棱镜(b)、物镜（c）组成。物镜将标本作第一次放大，然后目镜再将第一次放大的实像作第二次放大。棱镜是专为改变光路用的，物镜光束经棱镜后转向与垂直方向成45°角。 （2）照明系统由聚光镜（d）、可变光栏（e）、集光镜（f）和光源（g）组成。光源可选用自然或人工光源，人工光源由钨卤素灯发出，经集光镜平行光，然后聚光镜将外来光线聚在标本上，从而照明了标本，便于观察。 （二）结构 由光学部分（反光镜、聚光器、物镜和目镜）和机械部分（镜座、镜筒、镜臂、转换器、镜台、推动器、粗动螺旋和微动螺旋）组成（图1-2），主要部分件有： （1）目镜 通常备有5×、10×、16×，一般选用10×。 （2）物镜 它对分辩力有着决定性影响。一般有低倍镜（10×）、高倍镜（40×）和油镜（100×），通常按顺序安装在转换器上。 （3）聚光镜 具有使样品明亮的集光作用，同时还影响物像的分辩力和反差，若将聚光镜的光圈开放到超过物镜的数值孔径时，便产生光斑，若收扰光圈，分辩力下降但反差增大。常用聚光镜为二透镜，N.A=1.2，并带有可变光栏和滤光片架。 （4）载物台 又称镜台，载放样品用。一般都装有一个推进器，可由移动手轮作横向或纵向移动载玻片。 （5）粗调旋转 是调节载物台或镜筒上下移动的装置。细调旋扭转动一圈的升降值为0.2mm，刻值为0.002 mm。 （二）显微镜性能 1、数值孔径 显微镜分辩力的高低决定于光学系统的各种条件，但起决定性影响的是物镜。物镜的性能可用数值孔径（N.A来表示）。数值孔径又叫开口率，它与显微镜的分辩力成正比，与焦深成反比，与镜像亮度平方根成正比。 N.A