王玉芝-输血科常用实验及工作体会.ppt-山东省血液中心.ppt

输血科常用实验及工作体会 山东省立医院输血科 王 玉 芝 前 言 血型鉴定、交叉配血、抗体筛选试验是输血科目前最常用的试验，也是每个输血工作者应该熟练掌握的试验，根据工作经验我们认为在试验过程中一些细节容易被忽略，值得注意，现将工作中的一些体会与大家一起探讨交流，请大家提出宝贵意见。 ABO血型鉴定 1、鉴定原理：根据红细胞上有无A抗原或(和)B抗原及血清中有无相应抗体将血型分为A型、B型、AB型和O型四种 正定型（细胞定型） 反定型（血清定型） 2、方法：试管法、微柱凝胶法、玻片法 均为凝集试验 ABO血型鉴定（试管法） 1、试验材料： 正定试剂： 抗-A、抗-B（是否质控？质控要求？记录？） 抗-AB 确认弱A、B抗原，与弱A、B抗原亲 和力强,会产生较强反应。 抗-H 用于检查亚型及孟买型。 抗-A1 用于A亚型检测。 ABO血型鉴定（试管法） 反定试剂 A1细胞（为什么？）、B细胞，自制细胞的质控 O细胞 检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型。 自身对照 用于确认正反定型结果的有 效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)。 A2细胞 用于A亚型的鉴定（有些A亚型产生抗-A1抗体而不产生抗A2）。 ABO血型鉴定（试管法） 2、试验方法： 正定：1滴2~5%被检者红细胞+1~2滴标准血清混匀，3400 转15秒（转速的选择） 反定：2滴受检者血清+1滴标准红细胞混匀离心 ABO血型鉴定（试管法） 3、结果判定： 摇动力度，细胞扣边缘情况，弱凝集的判断（亚型尤其重要） 正定预期结果3+~4+，如果出现弱凝集应该考虑是抗原减弱还是亚型，不能轻易错过。 血型判定并记录 正反不一致的思考与解决？关键在于认识发现问题 ABO血型鉴定（试管法） 4、正反不一致的原因分析 实验人员技术操作错误 红细胞标本的相关问题 血清标本的相关问题 ABO血型鉴定（试管法） 技术操作错误 试剂浓度与配比，一般问题不大，但是比例不合适可能漏检亚型 忘记加试剂，试剂工作中有可能出现 结果判定，尤其对溶血结果的认识，如果是血清标本可能遇到，56度破坏补体验证 记录错误，实际工作中对于错误报告占很大比例 标本错误 ABO血型鉴定（试管法） 红细胞问题： ABO亚型！使正定凝集较弱，也是发现亚型的关键所在 白血病或其它恶性疾病使患者红细胞的A、B抗原减弱！！ 患者近期输入了ABO不同型红细胞，或ABO不同型的骨髓移植，可能出现混合视野。 红细胞获得性或遗传性异常，如获得性B抗原、T/Tn多凝集红细胞。 某些疾病（如腹腔癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗-A或抗-B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。 患者血清中的高效价自身冷凝集素使红细胞发生凝集！！ ABO血型鉴定（试管法） 血清标本相关问题 新生儿抗体阴性或很弱、老年人抗体减弱！！ 白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制剂的患者、先天丙种球蛋白缺乏的患者、免疫缺陷的患者抗体减弱！！ ABO不同型骨髓移植患者。 使用血浆或凝固不完全的血清会形成很小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块！！ 患者血清中有不规则抗体或自身冷凝集素！！ 某些疾病（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、何杰金淋巴瘤等）导致球蛋白水平增高，引起缗钱状凝集；纤维蛋白原水平增高，会引起缗钱状凝集；血浆增容剂（葡聚糖、PVP）也会引起缗钱状凝集导致假阳性结果。 ABO血型鉴定（试管法） 5、正反不符处理程序： 患者的年龄 患者的病史 患者的近期输血史 患者的近期用药史 患者是否进行了骨髓移植 患者以前的血型 家系调查 处理细胞、血清、改变试验条件增加试验（洗涤细胞、改变比例、反应温度、吸收放散、血型物质测定） ABO血型鉴定（试管法） 常见问题解决 ABO亚型 正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H 反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身对照 吸收放散 唾液型物质检测 有条件者可作家系调查 ABO血型鉴定（试管法） A、B抗原减弱 延长孵育时间、4℃孵育 酶处理红细胞 吸收放散 唾液型物质检测 既往血型调查 ABO血型鉴定（试管法） 抗体减弱 延长孵育时间、4℃孵育 加大血清用量（很实用) 既往血型调查 酶处理试剂红细胞 ABO血型鉴定（试管法） 冷自身抗体 将血清和红细胞分别在37孵育后再混合 用37℃温盐水洗涤红细胞、45℃热放散3分钟 巯基试剂(DTT)处理红细胞 自身吸收去除血清中的自身冷抗体 ABO血型鉴定（试管法） 室温反应的同种抗体 用谱细胞做抗体鉴定 选择没有相应抗原的A、B细胞做反定型 ABO血型鉴定（微柱法） 1、原理：是生物化学凝胶过滤技术和免疫学抗