质粒提取及酶切鉴定.pptVIP

（2）取1.5 mL离心管一支，加入1.4 mL菌液，13 000 r/min离心1 min去掉上清液。加入150 μL 的溶液Ⅰ，充分混悬细菌，在室温下放置10 min。 （3）加入200 μL新配制的溶液Ⅱ。加盖，颠倒5次使之混匀。冰上放置5 min。 （4）加150 μL预冷的溶液Ⅲ，加盖后颠倒5次混匀，冰上放置15 min。13 000 r/min离心5 min，取400 μL上清液移入另一离心管中。 （5）向上清液中加入等体积苯酚/氯仿，震荡混匀，13 000 r/min离心2 min，300 μL上清液转移至新的离心管中。 （6）向上清液中加入等体积无水乙醇，混匀，室温放置2 min。离心5 min，倒去上清乙醇溶液，将离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。 （7）加入1 mL 70 %乙醇，震荡并离心， 13 000 r/min离心2 min，倒去上清液，晾干，加入20 μL的 TE缓冲液，使 DNA完全溶解，待用。 2.质粒DNA的酶切鉴定 取一只1.5mL EP管加入以下试剂： 酶切混合液：15 μL 质粒DNA：5 μL 混匀后，置37 ℃过夜保温，反应结束后4 ℃放置备用。 * * * 左下角处有超级链接到配伍末端 实验一 质粒提取及酶切鉴定 P158 基因工程（genetic engineering）是指采用人工方法将不同来源的