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组织培养的步骤 培养基配制 配制MS大量元素母液 　 一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。 　　 分别称取 　　 NH4NO3 165g KH2PO4 17g 　　 KNO3 190g CaCl2·2H2O 44g 　　 MgSO4·7H2O 37g 各自配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中配制MS微量元素母液 　　一般将微量元素配制成100倍母液。 　　 依次称取 　　 KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025g 　　 H3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025g 　　 MnSO4·H2O 1.69gMnSO4·4H2O 2.23g CoCl2·6H2O 0.0025g 　　 ZnSO4·7H2O 0.86g 　　 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 　　 CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。分别称取 　　 CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g 　　 各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。 　　 配制MS有机母液 　　一般配制成100倍MS有机母液。 　　 依次称取 　　 肌醇 10g 盐酸硫胺素（VB1） 0.01g 　　 烟酸 0.05g 甘氨酸 0.2g 　　 盐酸吡哆醇（VB6） 0.05g 　　 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 　　 配制MS铁盐母液 　　一般配制成100倍MS铁盐母液。 　　 依次称取 　　 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g 　　 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 　　 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液，共8种母液。 　　 激素母液的配制 　　各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1ml/L的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1ml/L的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。 　　 2、配制培养基 　 以配置1L MS培养基为例，按顺序进行如下操作： 　　 先在烧杯中放入一些蒸馏水。 　　 分别取上面八种母液10ml倒入。 　　 一般称取30g蔗糖倒入，搅拌溶解。 　 加蒸馏水用量筒定溶至1L。 　　 按设计好的方案添加各种激素，由于激素的用量很小，而且激素对组培植物的生长至关重要。所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取，减少误差。 　　 用精密试纸或酸度计调整PH至5.7-5.8。（有条件的话使用酸度计，比较精确） 可配1ml/L的HCL和1ml/L的NaOH用来调溶液PH值。 　　1ml/LHCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。 　　1ml/LNaOH配制：称取NaOH 4g 配成100ml溶液。 　　 称取g左右琼脂粉（质量好的琼脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂粉熔化。 　　 稍微冷却后，分装入培养容器中。无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口，用橡皮筋或绳子扎紧。 　　 放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右。常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。 　　关阀再通电后，压力表上升达到0.1MPa时，开始计时，维持压力0.1-0.15MPa，20分钟。 　　 灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。 接种 成熟种子的表面消毒 选取成熟饱满、颜色和大小相对一致的成熟小麦，用 70%(v/v)酒精浸泡 5 min，无菌水冲洗 2~3 次，再经 0.1%的升汞（HgCl2）浸泡 20 min，无菌水冲洗 6~8 次后，置于无菌保湿滤纸上，33℃黑暗条件下预培养 2 h。 成熟胚愈伤组织的诱导和继代 待种子露白，用解剖刀在胚上纵切一刀，横切两刀，腹沟向下接种在诱愈培养液浸润的滤纸上，(26±1)℃暗培养 8 d。挑选胚性愈伤组织，每 2~3 周继代一次。 3 胚性愈伤组织的分化再生 选取胚性愈伤组织转入分化培养基，(26±1)℃暗培养 10 d 后，转入同温条件下光培养，光照强度为 40 μmol/(m2·s)，光照时间 16h/d。经过 40 d 的分化培养(每 10 天更换 1 次新鲜培养基)，形成绿芽原基和绿芽。待分化出的绿芽长至 2~3cm时，切取绿芽转至生根培养基，使之生根。 4 再生植株的春化及移栽 具有正常根系的再生植株长至 6~8 cm 时，4℃冰箱春化 6~8 w（16 h 光周期，光照强度为 40 μmol/(m2·s)，然后敞开