PCR操作规范1.pptVIP

②加样器通道易形成气溶胶，造成加样器通道污染，可通过使用有滤筛的吸头避免污染 （将模板DNA加入PCR系统时，注意切勿形成喷雾，后者有可能污染别的反应，所有并非即用管都应盖严）。 * ③ 打开标本管盖引起样品飞溅 （打开前须瞬间离心） ④操作时手套引起的交叉污染 （拿过模板DNA管后应更换手套） * ⑤不明原因引起公用试剂如液体石蜡等污染 （必须设置一个不含模板DNA但含PCR系统中所有其他成分的对照反应。这一对照管须在准备好所有其他PCR以后才进行吸加）。 ⑥实验室污染 * 3. PCR检测结果不稳定 （1）样品处理方法不当，标本中杂质很多， 血清标本有蛋白质、血红素、代谢产物等。 蛋白质——DNA电泳带拖尾 血红素中的卟啉化合物——抑制Taq酶活性 代谢产物——干扰引物配对 * （2）操作不当带来的后果 主要指不能严格按照说明进行操作造成PCR检测失败。 如HCV RNA PCR样品处理试剂A、B、C和75%乙醇的操作过程。 * 50μl血清标本 ( 标本可用血清或血浆，尽量避免使用肝素做抗凝剂， 避免反复冻融 ) ?加200