【2017年整理】五固相析出分离法.pptVIP

目标 掌握：盐析的原理及影响因素；有机沉淀的原 理、常用有机溶剂，等电点沉淀的机制 饱和溶液和过饱和溶液的概念 熟悉：盐析的操作过程和注意事项；有机沉淀 操作条件的控制，操作过程中应注意事项 结晶的一般步骤 了解：其他沉淀法;一、概述 1.定义——改变溶液条件使目标产物或杂质的溶解度降低而形成固体沉淀从溶液中分出的操作技术 析出物为晶体时称为结晶，析出物为无定形固体时称沉淀法 2.特点——浓缩倍数高、操作简便、经济、纯化倍数低 3.缺点：针对复杂体系而言，分离度不高、选择性不强;4、类型;一般沉析操作的过程;二、盐析沉淀法 ;★盐析法应用最广的是在蛋白质领域，已有八十多年的历史,除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离，20％～40％饱和度的硫酸铵可以使许多病毒沉淀，43％饱和度的硫酸铵可以使DNA和rRNA沉淀 ;盐析原理;Electric double layer;盐析过程;盐析用盐的选择;盐析剂的选择;影响盐析的因素;盐析用盐的用量选择;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;盐析操作方式及方法;盐析沉淀法的特点 ;有机溶剂沉淀;有机溶剂的选择;常用的有机溶剂沉析剂;有机溶剂沉淀的特点;影响有机溶剂沉析的主要因素;离子强度:少量的中性盐对蛋白质变性有良好的保护作用，但盐浓度过高会增加蛋白质在水中的溶解度，降低了有机溶剂沉淀蛋白质的效果，通常是在低盐或低浓度缓冲液中沉淀蛋白质，0.01~0.05mol/L 样品浓度: 0.5~2%， 稀：溶剂用量大，样品的损失较大，回收率低，具有生物活性 的样品易产生稀释变性。但共沉淀作用小 浓：节省溶剂用量，减少变性的危险，共沉作用强，分辨率 低，分离效果下降，有利于提高分离效果。 金属离子的助沉析作用：Zn2+、Ca2+;等电点沉淀;特点;成盐类复合物沉析剂;特点;高分子聚合物沉淀法;有机聚合物是六十年代发展起来的一类重要的沉淀剂，最早应用于提纯免疫球蛋白和沉淀一些细菌和病毒。近年来广泛用于核酸和酶的纯化。 应用最多的是聚乙二醇（ PEG )，它的亲水性强，溶干水和许多有机溶剂，对热稳定，有广泛围的分子量，在生物大分子制备中，用的较多的是分子量为6000～20000的 PEG。; 特点;离子型表面活性剂;结晶的概念;结晶操作的特点;结晶过程分析——几个概念;结晶过程的实质;结晶的步骤;过饱和溶液的形成 ;6.等电点法 7.微量扩散法 8.化学反应结晶法 9.共沸蒸馏结晶;提高晶体质量的方法;晶体结块;重结晶;1、常用的蛋白质沉淀方法有哪些？ 2、何谓盐析？其原理是什么？盐析操作时常用的盐是什么？ 3、影响盐析的主要因素有哪些？ 4、简述有机溶剂沉析的原理。影响有机溶剂沉析的主要因素有哪些？ 5、简述等电点沉析的原理。 6、饱和溶液和过饱和溶液的概念 7、结晶的一般步骤是什么？ 8、提高晶体质量的途径有哪些？