人可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)酶联免疫吸附测定试.pdfVIP

人可溶性血纤蛋白单体复合物（SFMC）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中SFMC含量。 实验原理 本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中待测物质水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗 体，往包被SFMC抗体的微孔中同时加入酶标的抗原和待测抗原，被测抗原与酶标记抗原对特异性抗体进 行竞争结合。经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用 下转化成最终的黄色。待测标本浓度越高，标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。显色的深浅 与酶量呈正相关，而与样品中待测物质含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）， 计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品：2瓶，每瓶临用前以0.8ml样品稀释液稀释，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助 溶解，其浓度为100ug/mL，做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）后，分别稀释成100ug/mL， 33.3ug/mL，11.1ug/mL，3.7ug/mL，1.23ug/mL，样品稀释液直接作为标准浓度0ug/mL，临用前15分钟 内配制。如配制33.3ug/mL标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 100ug/mL的上述标准品加入含有1ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。 4. 检测溶液A：2×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100 稀释，稀释前根据预先计算好的每次 实验所需的总量配制（每孔50ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液 A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 5. 检测稀释液A：2×10ml/瓶。 6. 底物溶液：1×10ml/瓶。 7. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 8. 终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。 9. 覆膜：1×5张 自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸 标本的采集及保存 1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本 放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本 放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 其它生物标本：请1000 xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免 反复冻融。 4. 样本处理： 血清或血浆标本推荐稀释500-1,000 倍。标本使用0.1M 的PBS稀释（PH=7.0-7.2）。 注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2 个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀 时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符 合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。用离心管稀释标准品以及样本，分别加标准品或待测样品50ul， 然后立即每孔加检测溶液A工作液 50ul，轻轻振动，混匀，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底 部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应60分钟。为保证实验结果有效性， 每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。 3. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟以内，此时肉眼可见标准品的后3-4孔有明显的梯度 兰色，前3-4孔梯度不明显，即可终止）。 4. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入 顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 5. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 注： 1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中