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天麻提取物作为流感疫苗佐剂免疫效果及安全性 　　[摘要] 目的 探讨天麻提取物作为流感疫苗佐剂的免疫效果及安全性。 方法 将BALB/c小鼠随机分为4组，每组10只。天麻提取物佐剂组：含血凝素1.8 μg，天麻提取物0.2 mg；氢氧化铝佐剂组：含血凝素1.8 μg，氢氧化铝佐剂0.2 mg；单独疫苗组：含血凝素1.8 μg；空白对照组：注射生理盐水0.2 mL。采用腿部肌内注射方式分别于0、21 d免疫2次，每次0.2 mL/只。自初次免疫开始，每隔7 d收集血清，测定小鼠血凝抑制抗体效价。初次免疫后7 d内，每天称量一次小鼠体重，监测各组小鼠的体重变化。 结果 天麻提取物佐剂组各时间点的血凝抑制抗体效价显著高于单独疫苗组、空白对照组，差异有统计学意义（P 0.05），注射部位未见不良反应产生。 结论 天麻提取物作为疫苗佐剂，具有良好的安全性，且佐剂效果明显，有望成为流感灭活疫苗的新型免疫佐剂 [关键词] 流感疫苗；佐剂；天麻；提取物 [中图分类号] R93；R392-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）11（a）-0004-04 流感是实行全球性监测的传染病，具有传播速度快、传染性强等特点[1]。目前预防流感最主要的手段是接种疫苗[2]。对潜在的大流行性流感病毒的各种疫苗的研究和开发应用，是大流行防备计划的一个重要举措之一[3]。佐剂加入流感疫苗中能够增强疫苗的免疫原性，降低抗原的用量[4]，扩大流感疫苗的生产数量[5] 天麻（Gastrodia elata Bl.）属兰科植物，其干燥块茎入药，气微，味甘。具有熄风止痉，平抑肝阳，祛风通络的功效。可用于治疗小儿惊风、癫痫抽搐、破伤风、头痛眩晕、手足不遂、肢体麻木和风湿痹痛等[6]。现代研究表明天麻具有增强特异性抗体生成以及细胞免疫应答的功能[7] 本研究首次选取天麻提取物作为灭活H3N2流感疫苗佐剂的效果，并与氢氧化铝佐剂对照组、疫苗组的佐剂效果进行比较，为其作为流感疫苗佐剂的可行性及安全性提供参考 1 材料与方法 1.1 动物及材料 清洁级BALB/c小鼠，雄性，28日龄，体重18～22 g，由中国医学科学院（北京协和医学院）医学生物学研究所（以下简称“我所”）动物中心提供，动物许可证号：SCXK（滇）2010-0003，合格证号：53002100000006；实验前将小鼠置于常温动物房中，饲养1周。流感病毒为H3N2A/Victoria/210/2009NYMC X-187，来源于WHO/NIBSC。H3N2流感病毒灭活疫苗单价原液为本实验室制备及保藏（血凝素含量为126 μg/mL）。天麻[来源于昭通天麻，昆明道地中药饮片厂惠赠，经昆明天紫江药厂工程师冯波（国家中药学职业药师）鉴定为Gastrodia elata Bl.）；氢氧化铝佐剂（浓度为14 mg/mL）由我所制备；受体破坏酶（receptordestroying enzyme，RDE）购自日本Seiken公司 1.2 方法 1.2.1 天麻提取物制备 取天麻粉末100 g，以液料比10∶1加入60°C的蒸馏水1000 mL，超声波破碎仪提取20 min后离心，上清液过滤后进行冷冻干燥，即为天麻提取物 1.2.2 动物分组及免疫 将小鼠随机分为4组，每组10只。天麻提取物佐剂组：注射含血凝素1.8 μg，天麻提取物0.2 mg的疫苗0.2 mL[8]；氢氧化铝佐剂组：注射含血凝素1.8 μg，?溲趸?铝0.2 mg的疫苗0.2 mL；单独疫苗组：注射含血凝素1.8 μg的疫苗0.2 mL；空白对照组：注射生理盐水0.2 mL。分别于0、21 d免疫2次，每次经腿部肌内注射，0.2 mL/只 1.2.3 各组免疫效果检测 于初次免疫后每隔7 d采集小鼠尾动脉血，分离血清，检测血凝抑制抗体效价[9]，连续检测6周 1.2.4 天麻提取物作为流感疫苗佐剂对小鼠生长情况的影响 自初次免疫之日起，连续7 d，每天称量1次小鼠体重，记录小鼠体重变化，通过对小鼠体重变化的统计分析，看天麻提取物佐剂组小鼠体重与其他对照组有无差异，并观察小鼠注射部位有无不良反应出现，从而初步评价天麻提取物佐剂的安全性 1.3 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组内不同时间点的比较采用重复测量数据的方差分析，组间比较采用单因素方差分析，以P 0.05），可初步表明该提取物佐剂的免疫增强作用先于氢氧化铝佐剂组产生。在抗体最高即初次免疫后35 d时，天麻提取物佐剂组与氢氧化铝佐剂组比较差异无统计学意义（P 0.05），说明在抗体产生峰值时，天麻提取物佐剂与氢氧化铝佐剂效果相当；35 d