分子课后习题参考.docVIP

第二章 分子生物学基本操作 1、PCR原理及其基本反应步骤 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板互补的DNA 链。 、细菌转化操作流程 1)将快速生长中的大肠杆菌置于经低温0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀（形成原生质球）。 2)与转化混合物中的外源DNA形成粘附在细胞表面的复合物。 3)立即将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激，复合物便会被细胞所吸收。 4)在全培养基中生长一段时间使转化基因实现表达、细胞活性恢复。 5) 涂布于选择性培养基中分离转化子。 、基因工程载体的特点 1)至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物体中自主复制。 2)?至少应有一个克隆位点，以供外源DNA插入。 3)?至少应有一个遗传标记基因，以指示载