分光光度法测定茶叶中多糖含量.docVIP

1绪论 1.1 茶多糖的结构与功能 茶多糖是茶叶中极具开发价值的一种生理活性物质，是一种酸性糖蛋白,并结合有大量的矿质元素，称为茶叶多糖复合物简称为茶叶多糖或茶多糖Tea Polysaccharide）。其是蛋白部分主要由约20种常见的氨基酸组成糖的部分主要由阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖等，矿质元素主要由钙、镁、铁、锰等及少量的微量元素，如稀土元素等组成。 0.85％ ±0.10％ ，绿茶为1.41％ ±0.06％ ，但该研究是以葡萄糖作标准曲线，而实际上如王丁剐[3]、汪东风[4]等报道，茶多糖是由阿拉伯糖、核糖、木糖、甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖等组成的杂多糖，其具体的单糖组成与茶叶的品种有关。而不同的单糖与蒽酮—硫酸试剂显色情况不同，不同单糖标准曲线的斜率不同，因而仅采用葡萄糖做标准的测定结果，会存在一定的误差，结果比实际含量偏低。 1.3 本文研究内容 本文用精制茶多糖测得茶多糖对葡萄糖的换算因子，然后将经前处理除杂后的茶样用水提取，蒽酮一硫酸法比色测定，对江西婺源不同茶场茶叶中多糖的含量进行了测定，并与其它产地、品种的茶叶进行了比较。 2 实验部分 2.1 实验仪器与材料 2.1.1 实验仪器 分光光度计，电子天平，水浴锅，旋转蒸发仪，真空干燥箱，离心沉淀机； 2.1.2 实验试剂 蒽酮、浓硫酸、无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、正丁醇，以上试剂均为分析纯； 2.1.3 实验原料 江西婺源红碎茶、绿茶、分宜绿茶、福建安澳乌龙茶。 2.2 实验方法 2.2.1 实验原理 选用精致茶多糖测得茶多糖对葡萄糖的换算因子，然后将经前处理后的茶样用水提取，蒽酮—硫酸法比色测定，对不同茶场茶叶中多糖的含量进行测定。 2.2.2 茶叶多糖的提取与精制［5、6］ 称取已干燥的40目茶叶粉末20g，置索氏提取器中，加入石油醚(沸程60oC一90oC)lOOml，90oC 回流提取1h脱脂，抽滤，滤渣挥干溶剂后．加80％乙醇200ml，90oC水浴回流lh，重复提1次，双层滤布过滤，滤渣加400ml蒸馏水，沸水浴回流提取1h，间歇搅拌。双层滤布过滤，滤渣加200ml蒸馏水，沸水浴再回流提取1 h，间歇搅拌，过滤，合并两次滤液，离心分离(400Or/min，10min)，真空浓缩(60oC ，50r/min，真空度0. 095Mpa)至20ml,Sevage法除蛋白，反复进行三次至无蛋白层，然后用流动自来水透析48h，蒸馏水透析24h，透析液中加人无水乙醇使乙醇浓度达80％ ，于4oC冰箱中过夜醇沉，再离心分离(400Or/min，10min)，沉淀依次用无水乙醇 丙酮、乙醚各洗两次，真空干燥(45oC，0.095Mpa)至恒重，即得精制茶多糖。称重，计算得率，备用。 2.2.3 标准曲线的绘制[7、8] 2.2.3.1 标准溶液的配制 精密称取105oC干燥至恒重的葡萄糖标准品0.2508g，置于250ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，配成1.O03mg/ml的标准溶液，然后分别提取2.5ml、5ml、lOml、15ml、20ml标准溶液，置于100ml容量瓶中稀释至刻度，摇匀，配成系列标准溶液。 2.2.3.2 蒽酮一硫酸试液的配制 称取0.33g蒽酮，加100ml浓硫酸，置于棕色瓶中，混合摇匀置于冰箱中(现配现用)。 2.2.3.3 吸光度的测定 分别准确移取lml系列标准溶液于具塞试管中．以lml蒸馏水作空白，每管再加入4ml蒽酮—硫酸试液，立即摇匀，置于冰水浴中，然后一起置于沸水浴中加热7min．之后用流动自来水迅速冷至室温，放置10min后，于62Onm处测定吸光度。以吸光度(A)对葡萄糖浓度(C)作回归处理，得回归方程：C=-0.00253+0.317A，r=0.9993。 2.2.4 换算因子的测定 精密称取45oC真空干燥至恒重的精制茶多糖10mg，置于25m1容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，90oC水浴加热．超声1min增溶．摇匀，制得茶多糖贮备液．蒽酮一硫酸比色法测定其吸光度(A)，由回归方程求出此精制茶多糖贮备液中葡萄糖浓度，测得其葡萄糖含量，按下式计算换算因子。因茶多糖干燥后溶解性降低．故按2.2.2中的方法制得多糖透析液后取等量10ml透析液两份．经醇沉洗涤后，一份直接加蒸馏水溶解(复水性好)，定容，比色，测定多糖含量, 另一份真空干燥至恒重，称得精制茶多糖的干重，由二者计算平均换算因子。 换算因子f=W/(C·D) (1—1) 式中：W为称取多糖的重量(mg)，C为精制茶多糖贮备液中葡萄糖浓度（mg／m1)，D为多糖的稀释因素。再按上法测定婺源红碎茶、分宜绿茶、福建安溪乌龙茶的换算因子f。 2.2.5 样品中茶多糖含量测定 2.2.5.1 样品溶液的制备 精密称取40目茶粉1g，加80