腹腔镜直肠癌根治术对细胞免疫及预后生存期影响.docVIP

腹腔镜直肠癌根治术对细胞免疫及预后生存期影响 　　【摘要】 目的：与传统开腹手术比较，分析腹腔镜直肠癌根治术对机体细胞免疫及生存预后和复发的影响。方法：选择本院收治的腹腔镜直肠癌根治术60例（腹腔镜组），开腹直肠癌根治术60例（开腹组），检测各组术前及术后CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞比例，对术后3年随访所得的生存及复发数据进行比较分析。结果：两组术后第3、7天各免疫细胞均低于术前（P0.05），具有可比性，见表1。 　　1.2 手术方式 麻醉方式取全麻联合气管插管方式，两组麻醉药物使用相同。腹腔镜组手术方式如下：全麻麻醉后取头高脚低截石位，在脐上、脐周腹直肌外缘和左右下腹分别放置套管针，建立气腹。找到病变部位后，查清肿瘤状态及大小。用超声刀离断乙状结肠系膜，暴露肠系膜下动脉。在直肠上动脉和乙状结肠动脉部位清扫淋巴结，然后夹闭并且剪去。在下腹部靠近耻骨处纵行切口，肿瘤组织下方2 cm处内镜下离断直肠，将病变组织切除。近端结肠肠腔中，置入圆形吻合器抵钉座，缝合后放入腹腔。扩肛后从肛门放进吻合器，和抵钉座对接。冲洗清理后留置引流管，清点器材后顺次缝合。开腹组手术采用常规开腹手术治疗。临床观察指标：术前及术后观察指标包括肿瘤下切缘距离、术中出血量、淋巴结数和肠动力恢复时间 1.3 流式细胞分析 使用流式细胞仪，免疫标记测定患者各时间点血清中T淋巴细胞（CD3+、CD4+、CD8+）和NK细胞的比例。分别在术前1 d（T1）及术后第3天（T2）、第7天（T3）3个时间点采集5 mL患者静脉血样，分装入硅胶促凝管，自然凝固后使用BECKMANCOULTER高速离心机于4 ℃下进行2000 r/min离心15 min，取上清血清，装入EP管，标记，置于-70 ℃冰箱（Sanyo-80 ℃深低温冰箱）保存；取1 mL装入EDTA抗凝管中，4 ℃保存，于24 h内，使用流式细胞仪测出T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞（CD3+/CD16+CD56+）活性百分数 1.4 ELISA法检测 ELISA法检测术前1 d（T1）及术后第3天（T2）、第7天（T3）3个时间点各组患者炎症因子IL-6、IL-8浓度。步骤如下：设立标准孔8孔，每孔中先各加入样品稀释液100 μL，第一孔再加标准品混100 μL，匀后用移液器吸出100 μL移至第二孔，如此反复作对倍稀释至第7孔，最后从第7孔中吸出100 μL弃去，使之体积均为100 μL。第8孔为空白对照。待测样品孔中每孔各加入待测样品100 μL。将反应板置于37 ℃孵育120 min。用洗漆液将反应板充分洗4～6次，向滤纸上扣干。每孔中加入第一抗体工作液50 μL。将反应板充分混匀后置37 ℃孵育60 min。再次洗板后，每孔加酶标抗体工作液100 μL。将反应板置于37 ℃孵育120 min。再次洗板。每孔中加入底物工作液100 μL，置于37 ℃暗处反应5～10 min。在每个孔内加入50 μL的终止液并吹打进行混匀。酶标仪设置于492 nm处进行测定样本吸光值 结果判断如下：以标准品1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0 pg/mL的OD值在半对数纸上作图，进而作出标准曲线。所有OD值均减去空白管值进行调零后计算。依照样品的OD值，使用标准曲线公式换算出相应样品中待测含量 1.5 质量控制 手术前对患者进行全面体检，严格排除各类严重合并症以保证手术过程顺利。全部腹腔镜直肠癌根治术和开腹直肠癌根治术严格遵照无瘤原则，保证各病例的手术质量无显著差异。病例的采用严格按照前述的纳入标准与排除标准进行。指标检测均由本院检验中心进行 1.6 系统随访 对所有患者及家属采用电话随访，对仍存活患者采用门诊随访。为提高随访率及最大限度对获取随访患者的真实信息，除日常门诊随访外，规定1年中有4个固定的随访时间：3、6、9、12个月的第一周，要求在这一周内完成之前所有患者的随访，如患者能来院则进行门诊随访，不能来院则进行电话随访，要求在电话中完成全部所需信息的查询，连续记录3年，截至2016年1月。统计两组3年的失访率、复发率和生存率 1.7 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，若方差不齐采用Welch法，组间多重比较采用DunnettsT3检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验。不同组患者随访结果的生存分析使用Kaplan-Meier法，组间生存率比较使用Log-rank检验。P0.05），见表2 2.2 两组T淋巴细胞与NK细胞流式分析 两组T淋巴细胞亚群和NK细胞在T2、T3时均显著低于术前1 d（P0.05）。T2和T3时，腹腔镜组炎