从个性化医疗看分子诊断的发展2.pptVIP

基因表达与临床用药 QPCR-HRM技术 HRMA技术（high-resolution melting analysis）即高分辨熔解曲线分析技术，是近年兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR技术，HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变、单核苷酸多态性-SNP、甲基化、HLA配型等的分析。 一、QPCR-HRM技术介绍 HRM的主要原理是根据DNA序列的长度，GC含量以及碱基互补性差异，应用高分辨率的熔解曲线对样品进行分析，极高的温度均一性和温度分辨率使分辨精度达到对单个碱基差异的区分。 HRM技术原理图 HRM技术特点 HRM的特点是高灵敏度和高特异性，检测灵敏度可以达到5%，既能检测出已知突变，也能检测出未知突变。 qPCR-HRM的突变检测已获国际多中心双盲实验验证，灵敏度和准确性比国际公认的DxS（Qiagen收购）公司产品还要更好，见下述参考文献1。 HRM技术应用举例（SNP） 检测低水平突变的新方法—COLD-PCR技术 如果COLD-PCR技术结合特异探针，其检测灵敏度是否还会提高？是否能够检测血浆中游离DNA的低比率突变？ 吉非替尼治疗非小细胞肺癌历程 首次 临床试验 对药物的反应率：9%-18% 总体生存率：无明显提高 根据EGFR 基因突变分组 基