【2017年整理】色谱技术答案.docVIP

1若想建立某中药的醇提液的RPHPLC指纹图谱，是采用等度洗脱还是梯度洗脱？简述其分析条件的优化。 答：1系统梯度洗脱 由于中药的醇体液成分复杂，样品的K（容量因子）范围宽，不能用等度洗脱，梯度洗脱可以使不同K值的样品成分洗脱时随流动相的连续改变而趋于同一K值，谱峰尖锐而对称，分离度改善，缩短分离时间，降低最小检测量和提高分离精度，从而让所有成分均出峰 2．优化思路： 梯度期间，强溶剂的浓度B%增大，优化梯度条件起始B%，终止B%，梯度时间t和溶剂B的种类，因此在RPHPLC指纹图谱建立时，考虑流动相种类，流动梯度范围和梯度斜率三方面。 流动相种类的选择：RPHPLC中常用甲醇，乙腈，四氢呋喃等有机溶剂与水混合，流动相种类由样品分离难易程度决定。MeoH、CAN、THF洗脱强度逐渐增高，样品易分离时采用溶剂优化法选择流动相和水的最佳比例，调整K值，使其在1—20(tR:3—35min). 梯度范围：即起始和终止B%一般为5%--100%（tR：30min）若谱图前段空白可提高初始B%，末端空白需降低终止浓度，可节省时间缩小梯度范围使所有组分短时间从柱中洗脱出来 梯度斜率：根据初步分离的谱图，峰密集部位可降低斜率，减小强溶剂B%变化速度，峰疏散部分提高梯度斜率，时间短 2，根据Van deemter f方程在液相色谱中的表现形式，分析在HP