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实验一培养基的配制和灭菌一、仪器与材料1．培养皿（d=90mm）12套；试管（20mm×200mm）12支；移液管（10mL）2支，（1mL）4支；锥形瓶（250mL）2个；烧杯（100mL）1个，天平；量筒，漏斗等。2．纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）3．精密pH试纸6.4～8.4；10％盐酸；10％NaOH；4．牛肉膏；蛋白胨；氯化钠；琼脂；蒸馏水；5．高压蒸汽灭菌锅；烘箱；酒精灯；二、操作步骤(一)玻璃器皿的洗涤和包装1．洗涤玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。培养皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自来水冲净。移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗干净。洗刷干净的玻璃器皿自然晾干或放人烘箱中烘干、备用。2．包装（1）将移液管放在4-5 cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约成30°夹角，折叠包装纸包住移液管的尖端(如图4-1)，用左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下纸头折叠打结。按实验需要，可单支包装或多支包装，待灭菌。（2）用棉塞将试管管口和锥形瓶瓶口部塞住棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，故在微生物工作中一直普遍使用。棉塞的制作（见图4-2和图4-3）：按试管口或锥形瓶口大小估计用棉量，将棉花铺成中心厚，周围逐渐变薄的圆形或方形，对折后卷成卷，一手握粗端，将细端塞入试管或锥形瓶的口内，棉塞不宜过松或过紧，用手提棉塞，以管、瓶不掉下为准。棉塞四周应紧贴管壁和瓶壁，不能有皱折，以防空气微生物沿棉塞皱折侵入。棉塞插入2/3，1/3留在管口(或瓶口)外，便于拔塞。试管、锥形瓶塞好棉塞后，用牛皮纸包并用细绳或橡皮筋捆扎好放在铁丝或铜丝篓内待灭菌。（3）培养皿由一底一盖组成一套，用牛皮纸或报纸将10套培养皿(皿底朝里，皿盖朝外，5套、5套相对)包好。实验二细菌的纯种分离、培养和接种技术 实验器材无菌培养皿（直径90mm）、无菌移液管1mL、10mL；营养琼脂培养基1瓶；接种环、酒精灯或煤气灯、恒温箱。细菌纯种分离步骤细菌纯种分离的方法有两种：稀释平板和平板划线法。本实验重点训练平板划线法。1.平板的制作：将融化并冷至50℃的肉膏蛋白胨培养基倒入无菌培养皿内，使凝固成平板。2.操作：用接种环挑取一环活性污泥（或土壤悬液等），左手拿培养皿，中指、无名指和小指拖住皿底，拇指和食指夹住皿盖，将培养皿稍倾斜，左手拇指和食指将皿盖掀半开，右手将接种环伸入培养皿内，在平板上轻轻划线（切勿划破培养基），划线的方向可取图 5-1中任何一种。划线完毕盖好皿盖，倒置，30℃培养24～48小时后观察。五、斜面接种技术这是将长在斜面培养基（或平板培养基）上的微生物接到另一支斜面培养基上的方法（图5-2）。1.接种前将桌面擦净，将所需的物品整齐有序的放在桌上。2.将试管贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人、组别、姓名等。3.点燃酒精灯。4.将一支斜面菌种和一支待接的斜面培养基放在左手上，拇指压住两支试管，中指位于两支试管之间，斜面向上，管口齐平。5.右手先将棉塞拧松动，以便接种时拔出。右手拿接种环，在火焰上将环烧红以达到灭菌（环以上凡是可能进入试管的部分都应烧灼）。 6.在火焰旁，用右手小指、无名指和手掌夹住棉塞将它拔出。试管口在火焰上微烧一周，将管口上可能沾染的少量菌或带菌尘埃烧掉。将烧过的接种环伸入菌种管内，先触及没长菌的培养基使环冷却，然后轻轻挑取少许菌种，接种环抽出管外迅速伸入另一试管底部，在斜面上由底部向上划曲线。抽出接种环，将试管塞上棉塞并插在试管架上，最后再次烧红接种环，则接种完毕。实验三活性污泥细菌生长曲线的测定一．实验材料：培养后的活性污泥的细菌及平板培养基：牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基5个仪器：取液器（5000μl，1000μl各一支）；培养箱，摇床，分光光度计；3 . 实验用具：无菌吸头（1000μL 80个，5000μL 2个）；比色皿8个公用参比杯1个 二.操作过程1.接种前将桌面擦净，将所需的物品整齐有序的放在桌上。 2.将试管贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人、组别、姓名等。 3.点燃酒精灯。 4.以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液中，静止培养18h作种子培养液。5.取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的培养皿8个，分别编号为0、0.4、1.2、2、2.4、3.2、4h。 6.用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的8（其中有一个只有培养液，不加细菌作对照）个培养皿中，于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将培养皿取出，立即放冰箱中贮存，待培养结束时一同测定OD值。7.将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测