第十二章食品中转基因成分检验.pptVIP

食品理化检验 二 转基因食品的特征 基因重组元件： （1）载体：目的基因—载体—受体细胞 运载工具 （2）目的基因：以修饰受体细胞遗传组成并表达遗传效应为目的，与转运基因生物的性状改变直接相关的DNA片段。 食品理化检验 二 转基因食品的特征 基因重组元件： （3）调控元件：启动子，是一类为目的基因的转录提供起始信号及起始位点的特殊核苷酸序列；终止子。 （4）标记基因和报告基因：标记基因是在基因重组操作过程中筛选转化细胞，并使之与非转化细胞分离；报告基因是根据报告基因表达产物的特异性，从而与非转化细胞分离。 食品理化检验 第二节 食品中转基因成分的检测 三、外源基因检测 根据检测目的和检测结果特异性水平不同，转基因食品的外源性DNA检测方法可分为四类： 1、初筛试验 2、基因特异性试验 3、组成结构特异性试验 4、事件特异性试验 食品理化检验 第二节 食品中转基因成分的检测 三、外源基因检测 初筛试验：直接检测基因重组体中通用元件的方法。包括35S启动子、胭脂碱合成酶终止子或抗性筛选基因NPTⅡ基因。 仅能鉴别产品是否含有基因重组体 需要做进一步的确认试验排除假阳性 食品理化检验 第二节 食品中转基因成分的检测 三、外源基因检测 基因特异性试验：针对目的基因、标记基因或报告基因的特异性进行检测。 组成结构特异性试验：针对目的基因与调控基因连接处的核苷酸序列区段进行检测和鉴定。 食品理化检验 第二节 食品中转基因成分的检测 三、外源基因检测 插入位点构成特异性试验（事件特异性试验）：针对插入序列与植物基因组之间的连接区的特异性的检验。是具有唯一性的转基因生物鉴定的内在标识和指标。 食品理化检验 第二节 食品中转基因成分的检测 三、外源基因检测 1、试样准备： 固体研磨至2mm直径以下或者液氮研磨。 液体离心沉淀、加热蒸发、冷冻干燥——干物质 2、CTAB法： CTAB法原理：利用CTAB与DNA形成CTAB-DNA复合物，该复合物在高盐溶液（0.7mol/L NaCl）与低盐溶液（0.3mol/L NaCl）的溶解度差异，进行提取纯化，最后用乙醇或异丙醇在高盐溶液中将DNA进一步纯化。 食品理化检验 第二节 食品中转基因成分的检测 三、外源基因检测 CTAB方法说明： 1、至少需要100mg样品 2、CTAB法提取纯化后，立即PCR检测的，用去离子水溶解；需要较长时间后检测的用TE缓冲液溶解