神经红蛋白突变体(F28Y,F106Y)的构建、表达与表征.pdfVIP

VoI. 27 高等学校化学学报 No. 4 2 0 0 6 年4 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 641 ~ 645 神经红蛋白突变体（F28Y ，Fl06Y ）的 构建、表达与表征 1 1，2 1 1 1 1 赵 超 ，李连之 ，冀海伟 ，王 莉 ，许 涛 ，刘金凤 （1. 聊城大学化学化工学院，聊城252059 ；2. 南京大学配位化学国家重点实验室，南京210093 ） 摘要 构建了神经红蛋白F28Y ，F106Y 的两种突变体，并进行了表达、纯化和谱学表征. 电喷雾质谱表明突 变体蛋白的分子量与理论值一致. 氧化型和还原型F28Y 及F106Y 的紫外-可见吸收光谱与野生型相似，仅 氧化型F28Y 的Soret 带有2 nm 的蓝移，说明这两种突变体蛋白仍保持六配位形式. F28Y 的荧光最大发射 峰明显红移（340 nm!347 nm ），表明其荧光基团更加暴露于极性环境中. 圆二色光谱表明，突变体蛋白的 -螺旋含量降低且F28Y 产生了 -折叠，这是由于F28 相对于F106 则位于疏水腔外部且更加接近于溶剂表 ! 面所致. 热稳定性顺序为NGB F28Y F106Y ，F106Y 最不稳定，是因为其与血红素间存在着较强的疏水作 用，突变使F106 与血红素间的作用力减弱，从而导致血红素在热变性条件下更容易从蛋白中解离出来. 关键词 神经红蛋白；突变体；表征；稳定性 中图分类号 O629. 73 ；@518. 2 文献标识码 A 文章编号 0251-0790 （2006 ） 04-0641-05 ［1］ 神经红蛋白（NeurogIobin ，NGB ，图1 ）是Burmester 等 在人和鼠脑中发现的一种新颖的珠蛋白类 型，主要在脑和其它神经组织中表达. 它由一条含151 个氨基酸的肽链和血红素b 组成，与血红蛋白 和肌红蛋白相比，其氨基酸序列的同源性虽然很低（20% ~ ［2 ~ 4 ］ ［5 ，6 ］ 25% ） ，但空间结构很相似 . 饶有兴趣的是，神经红蛋 白中的血红素Fe 在无外源性配体存在时是六配位，即血红素 Fe 以4 个吡咯N 原子作为赤道配体、以蛋白肽链上的2 个组 氨酸（His64 和His96 ）上的咪唑N 原子作为轴向配体形成八面 体结构，而血红蛋白和肌红蛋白中的血红素Fe 则是五配位形 式. 新的结构必将赋予该蛋白新的性质与功能. 研究表明， NGB 是一种低氧/ 缺血条件下诱导的神经组织蛋白，当脑缺血 时NGB 的表达量增加，NGB 的高表达对神经细胞具有保护作 Fig. l Structure of human NGB 用［7 ］，但关于NGB 的确切生物学功能还不清楚. 因此，该蛋白 The sites of the Phe28 and Phe106 are marked. 的发现为生物配位化学和医药学研究提出了新的课题. 我们已对重组人神经红蛋白进行了表达、分离 纯化和谱学表征［8 ］，这为神经红蛋白的化学生物学研究奠定了基础. 定点突变是研究蛋白质结构、性 质与功能关系的有力手段，目前神