【2017年整理】03-蛋白质-2.pptVIP

;;;NH2;肽的结构与肽键;氨基酸借肽键连接的分子叫肽，肽是一大类物质，即： ;单位小分子 N-C-C-N-C-C-N-C-C;肽的书写;p 轨道电子共振使肽键具双键特性;N;Pro形成的肽链肽平面是可以反式也可以顺式。;两肽键 平面的交接点为 a-碳;多肽链可以看成由Ca串联起来的数个酰胺平面组成;1、?? 旋光性 一般短肽的旋光度等于其各个氨基酸的旋光度的总和。 2、?? 肽的酸碱性质 短肽在晶体和水溶液中是以偶极离子形式存在。 肽的酸碱性质主要取决于N端a-NH２和C端a-COOH以及侧链R上可解离的基团。 在长肽或蛋白质中，可解离的基团主要是侧链基团。 ;pH 优势离子的净电荷： 3.5 +2 3.5-4.6 +1 4.6-7.8 0 7.8-10.2 -1 10.2 -2;肽的a-羧基，a-氨基和侧链R基上的活性基团都能发生与游离氨基酸相似的反应。 双缩脲反应 NH2-CO-NH-CO-NH2 (双缩脲），能与CuSO4-NaOH产生颜色反应。 凡是有肽键结构的化合物都会发生双缩脲反应，可用于定量分析。 双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应，游离氨基酸无此反应。;1、?? 谷胱甘肽（GSH） 三肽（Glu-Cys-Gly），广泛存在于生物细胞中，含有自由的巯基，具有很强的还原性，可作为体内重要的还原剂，保护某些蛋白质或酶分子中的巯基免遭氧化，使其处于活性状态。;;2.促甲状腺素释放激素：三肽（焦谷氨酰组氨酰脯氨酸），可促进甲状腺素的释放。 ;5.牛催产素与加压素：均为九肽;脑啡与其受体结合后可以产生镇痛效果;H3N+– CH – C – N – CH – C – O – CH3;;一 级结构;一级结构（共价结构）： 蛋白质分子中氨基酸残基的排列顺序。;意 义： 1、研究蛋白质的一级结构是研究蛋白质结构与功能的基础，这是因为Pr的一级结构决定了它的高级结构，从而决定了蛋白质的生物功能。 2、一级结构的研究为生物进化提供了依据， 不同生物的同一种蛋白的其一级结构是不同的。 3、一级结构的研究为一些分子病的诊断提供了依据。 只有将蛋白质的一级结构研究清楚后，生化工作者才能站到一个优越的地位去洞察，研究生命过程中的许多复杂问题。;F. Sanger (1951, Cambridge U) Insulin 胰岛素 (A, B chains);阶段一：测序前的准备工作;阶段二：多肽链的测序;阶段三：氨基酸顺序的拼接;N-末端分析 A.化学法 DNS-Cl法：最常用，黄色荧光，灵敏度极高，DNS-多肽水解后的DNS-氨基酸不需要提取。 DNFB法：Sanger试剂，DNP-多肽，酸水解，黄色DNP-氨基酸，有机溶剂（乙酸乙酯）抽提分离，纸层析、薄层层析、液相等。 PITC法：Edman法，逐步切下。无色PTH-氨基酸，有机溶剂抽提，层析。 ;N-末端分析 B.酶 法（氨肽酶法） 从多肽链的N-末端逐个地向里切。根据不同的反应时间测出酶水解所释放的氨基酸种类和数量，按反应时间和残基释放量作动力学曲线。 亮氨酸氨肽酶：最常用 氨肽酶M：较常用;N-末端分析 C.常见问题及处理方法：;② C-末端分析 A.肼解法 无水肼NH2NH2 100℃ 5-10h。 苯甲醛沉淀氨基酸的酰肼，C端游离氨基酸留在上清中。 Gln、Asn、Cys、Arg不能用此法。 ;② C-末端分析 B.还原法, 硼氢化锂(LiBH4) 肽-COOH?生成肽-CH2OH?水解,分离,层析鉴定。 此法比较少用。 C.羧肽酶法，（Pro不能测）; ①.多肽链之间的连接方式 A.共价键 二硫键 -S-S- 酰胺键 -CO-NH- 酯键 -CO-O- B.非共价键 氢键 R……H 离子键 R+……R- 疏水作用 R R 范德华力 R R;; ②.肽链的拆离方法 A.二硫键的拆离 过甲酸氧化法和巯基化合物（巯基乙醇）还原法。 B.非共价键的拆离 8M 尿素或6M