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第八章 真核生物基因表达调控 THE CONTROL OF EUKARYOTIC GENE EXPRESSION 一、真核基因组结构特点 真核基因组结构庞大 3×109bp、染色质、核膜 单顺反子 基因不连续性 断裂基因（interrupted gene）、内含子(intron)、 外显子(exon) 非编码区较多 多于编码序列(9:1) 含有大量重复序列 二、真核生物基因表达调控的特点 1、多层次 2、个体发育复杂 3、正性调节占主导 4、转录与翻译间隔进行 核小体(nucleosome) 2、核小体的结构 Mononucleosomes typically have ~200 bp DNA. End-trimming reduces the length of DNA first to ~165 bp, and then generates core particles with 146 bp. The 10 nm fiber is a continuous strong of nucleosomes. 第二节 DNA水平的调控 基因丢失： 在细胞分化过程中，某些原生动物、线虫、昆虫等体细胞通过丢失某些基因而除去这些基因的活性。 马蛔虫：只有一对染色体，染色体上有许多着丝点。 发育早期：只有一个着丝点行使功能，保证了正常有丝分裂的进行； 一定阶段：将来分化产生体细胞的细胞中染色体断裂，形成许多小染色体。 含着丝点的小染色体：以后的细胞分裂中都保持下去； 不含着丝点的小染色体：因不能在细胞中正常分配而丢失。 将来行成生殖细胞的细胞中，不存在染色体断裂现象。 四膜虫： 大核： 营养核 可转录 小核： 生殖核 无转录活性 大核由小核发育而来，发育过程中有多处染色质断裂，并删除约10%的基因组DNA。被删除序列的存在可能抑制了基因的正常表达。 高等生物中，基本上没有类似的基因丢失现象-全能性 特例：红细胞 基因扩增 通过改变基因数量来调节基因表达产物的水平 非洲爪蟾卵母细胞: 为储备大量核糖体以供卵细胞受精后发育的需要，通常都要专一性地增加编码核糖体rRNA的基因（rDNA） rDNA的滚环复制： 拷贝数由1500→2×106，总量可达细胞DNA的75%，当胚胎期开始后，所合成的rDNA失去需要而逐渐降解消失。 活泼转录区染色质的结构变化： 染色质的两种状态： 非活性状态【inactive (silent) state 】:如异染色质 活化状态【active state 】： 活泼转录区对核酸酶的敏感性提高 正在转录的DNA甲基化程度降低； 活泼转录的染色质常常缺乏组蛋白H1，其他核心组蛋白则被乙酰化或与泛素相结合而修饰 非常活泼的转录区，如许多真核生物的rRNA基因处，没有核小体结构 两种状态的相对稳定性： 如果在启动子处形成核小体，转录因子和RNA聚合酶就不能结合 如果转录因子结合和RNA聚合酶结合于启动子区域，形成稳定的起始复合物，组蛋白就被排斥在外 基因表达与否，是转录因子还是组蛋白首先与控制位点相结合，是一个很重要的因素 一旦形成相对稳定的结构，不会再由于转录因子和组蛋白游离成分浓度平衡的变化而改变 染色质重建（Chromatin remodeling ） 指在基因转录活化时，核小体组蛋白置换和重排过程。包括： 组蛋白八聚体在DNA上滑动，改变特定序列在核小体表面的位置 组蛋白八聚体之间的间距发生改变 组蛋白八聚体和DNA分离，产生无核小体的游离DNA间隙 染色质重建（Chromatin remodeling ） 染色质重建需要重建复合体的参与 Remodeling complex 重建复合体的中心是它的ATP酶亚基 组蛋白的修饰： 组蛋白N端尾部，尤其是H3和H4的修饰，起始了染色质结构的变化 甲基化、乙酰化和磷酸化 通常认为乙酰化和活性染色质，甲基化和非活性染色质相关，但这并非是一个统一的规律 乙酰化： 乙酰化是可逆的，分别由相应的酶来催化 乙酰化：组蛋白乙酰转移酶（HAT） 去乙酰化：组蛋白去乙酰化酶（HDAC） 甲基化： 大多数DNA甲基化的位点是CpG岛，在异染色质中CpG序列通常是甲基化的，而启动子区域CpG岛的非甲基化是基因表达所必需的 第三节 转录水平的调控 一、?gene调控的顺式作用成分： 1、? 启动子：位于转录起始位点附近，具有相对固定位置，且为转录起始所必需的序列元件 启动子一般模式： 核心启动子，TATA框 上游启动子成分（UPE），除了CCAAT框外，其他成分因各gene而异 TATA框控制转录的精确性，而UPE则控制转录的起始频率，启动子的强度决定