生物化学——酶.ppt

2.调节mRNA的降解速率 很多关键酶的mRNA寿命较短 （二）酶蛋白降解的调节 通过调节酶的降解速度以控制酶的活性。 特点：调节酶的半衰期一般短 三 、 同功酶(isoenzyme) 同功酶：分子结构、底物亲和力、抑制剂等不相同但催化相同化学反应的一组酶 。 乳酸脱氢酶（LDH） 体内共有五种分子形式： LDH1（H4） LDH2（H3M） LDH3（H2M2） LDH4（HM3） LDH5（M4）。 心肌中：LDH1（H4） 骨骼肌：LDH5（与丙酮酸的亲和力高） 同功酶的意义：适应不同组织或不同细胞器在代谢上的不同需要 第六节 酶分离纯化及酶活性测定(自学） 一、酶的分离纯化 （一）目的 研究－酶的理化性质 利用－生化试剂或药物 （二）提纯时要注意的问题 1.低温操作： 0－5℃ 有机溶剂：－15 ℃到－20 ℃ 2.加入蛋白酶抑制剂 3.加入特殊的物质，防止酶失活 EDTA－重金属 巯基乙醇：－SH 4.不能过度搅拌（防止产生泡沫） 5.pH不能过高或过低 6.保存：－20 ℃以下 二．酶活力的测定 （一）酶活力:酶催化一定化学反应的能力 （二）酶促反应速度 1. 表示方法：单位时间内，单位体积中底物的减少量或产物的生成量来表示（浓度/单位时间） 2.测定方法（产物或底物的理化性质） 比色、紫外吸收等 本章要点 一、概念：酶、酶的活性中心、诱导契合学说、辅助因子、酶促反应动力学、米氏常数、酶的转换数、酶的抑制剂、酶原激活、酶的变构调节、共价修饰调节、关键酶、同功酶、酶活力。 二、符号解释： LDH、Km、Vmax 三、主要内容 1.酶与一般催化剂的区别。 2.酶的结构（活性中心、辅基与辅酶的区别）。 3.酶促反应动力学[重点：底物浓度对酶促反应速度的影响(米氏方程、Km及Vmax的意义，Km和Vmax值的测定方法)；几种可逆抑制剂存在时，Km及Vmax的变化]。几种因素（T、pH、底物浓度--反应速度的曲线形式）。 米氏方程式的推导过程不记，但应该掌握推导的前提： （1）在反应初速度条件下，E+P逆向生成ES的量可忽略不计 （2）反应体系处于稳定状态时， ES生成的速度与ES分解的速度相等 （3）ES分解为E+P的反应为慢反应，是限速反应。 （4） 在[S][E]， [ES] = [E] ,反应达到最大速度。 4.酶活性调节的几种方式 5.酶分类（六大类） 6.酶的催化机理（降低反应活化能、诱导契合学说内容，酶促反应的几种催化机制一般了解）。 * ④抑制作用的强弱取决于I与S的浓度比,以及二者与酶的亲和力强弱 ⑤增大底物浓度可解除抑制作用 -----显著特点 例： 丙二酸等竞争性抑制琥珀酸脱氢酶 底物 抑制剂 酶 1/v 有I 无I 1/S 1 - Km(1+[I]/KI） 1/Vmax I S E 应用：磺胺类药的抑菌作用 I 2、非竞争性抑制(non competitive inhibition,mixed inhibition) ① I可与E及ES结合（底物结合中心以外的位点） K1 K3 E+S ES E+P + K2 + I I EI+S ESI KI Ki ②动力学特点： 1.有I存在，可形成ESI(不能转化为产物），Vmax 2. Km不变 ③ 增加底物浓度不能解除非竞争性抑制剂 的抑制作用。 1/v 有I 无I 1/S 3、反竞争性抑制(uncompetitive inhibition) ① I只能与ES复合物结合 生成ESI后酶失去催化活性 K1 K3 E+S ES E+P K2 + I ESI 米氏方程式 Ki Vm[S] (Ki+[I]) V= Ki