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第2章 愈伤组织培养 第2章 愈伤组织培养(3学时) 本章主要内容： 愈伤组织的诱导与分化 愈伤组织的继代培养 愈伤组织的形态发生 不定芽和根的发生 体细胞胚的发生 愈伤组织培养的应用 本章教学目的与要求 1、了解愈伤组织细胞分化的各时期的特点 2、掌握植物激素控制理论 3、掌握愈伤组织的形态发生 4、区别胚状体发生途径与器官发生途径形成植株 5、愈伤组织培养在园艺植物育种中的应用 定义:是指将外植体接种到人工培养基上，在激素作用下，进行愈伤组织诱导、生长和分化的培养过程。 第一节 愈伤组织的诱导和分化 一． 愈伤组织的诱导 诱导愈伤组织的关键主要是培养条件，其中激素的成分和浓度是最重要的因素。 Photo indicating where the callus (c) arises from Wound callus on the stemof an Erythrina tree 刺桐树 二．愈伤组织的分化 从外植体脱分化形成典型的愈伤组织大致可分为三个时期： Stage 1. Induction（诱导期）: 诱导期细胞内发生的变化 气体交换增加，如氧气的吸收增加 RNA含量增加（增加到300%） 蛋白质量增加（每个细胞的总增加量为200%） 酶活性增强 Stage 2. Cell division 分裂期 1.细胞的数目迅速增加。 2.每个细胞平均鲜重下降。 3.细胞体积小，内无液泡。 4．细胞的核和核仁增大到最大。 5.细胞中RNA含量减少，而DNA含量保持不变。 6. 随着细胞不断分裂和生长，细胞总干重、蛋白质和核酸量大大增加，新细胞壁合成极快。 细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，维持其不分化的状态，颜色浅而透明。 Stage 3. Differentiation 分化期 A 细胞分裂部位和方向发生改变： B 形成瘤状或片状的分生组织结节。或维管组织结节。 C 细胞的体积相对稳定，不再减少。 D 出现了各种类型的细胞：如管胞、纤维细胞、薄壁细胞、分生细胞、色素细胞等。 E 生长旺盛的愈伤组织呈乳白色、白色或浅绿色，老化的多转化为黄色或褐色。 Callus types： Callus may have a yellow, white, green or red (anthocyanin 花青苷) appearance. 第二节 愈伤组织的继代培养 1、定义：培养物在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养,这个过程叫做继代培养。 2、愈伤组织培养的调控因素： （一）材料本身 1．无机营养 培养基中的N，大多数都用硝态氮，对细胞分化起重要作用。 器官分化的植物激素控制理论(激素配比模式) 生长素与细胞分裂素的比值是根和芽形成的控制条件，决定着发育的方向:是愈伤组织、长根还是长芽。 高 利于根的形成 生长素/细胞分裂素 适中 利于愈伤组织的形成 低 利于芽的形成 培养基中加入糖、各类B族维生素、肌醇和甘氨酸等，可满足愈伤组织生长和分化的要求。 各种氨基酸和嘌呤、嘧啶类物质，可促进器官分化。 水解酪蛋白中含有多种氨基酸，助于器官分化 酰胺类往往有促进器官形成的作用。 （三）培养条件 第三节 愈伤组织的形态发生 形态建成：外植体细胞在适宜的培养条件下发生脱分化、再分化，产生芽和根，或者形成胚状体，发育成苗或完整植株。 愈伤组织的形态发生方式: 愈伤组织的器官发生顺序有四种情况： （1）愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成，即无根的芽或无芽的根； （2）先长芽，后长根，多数情况； （3）先长根，再从根的基部长芽。这种情况较难诱导芽的形成，尤其对于单子叶植物； （4）先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根，然后两者结合起来形成一株植株。 胚状体（embryoid）：指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成具有双极性的胚状结构。 注意：体细胞胚 胚状体与合子胚的比较: 由外植体经胚状体形成完整植株的过程： 胚状体发生途径与器官发生途径形成植株的区别: ①胚状体具有两极性，即有茎端和根端。 ②胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系。 ③胚状体维管组织的分布是独立的“Y”字形。 体细胞胚发生与器官发生 胚状体方式比不定芽方式有更多的优点： 胚状体产生的数量比不定芽多； 胚状体可以制成人工种子，便于运输和保存； 胚状体的有性后代遗传性更接近母体植株。