CQ复方对癌侵袭镜像痛模型小鼠镇痛作用及其中枢机制探析.doc

CQ复方对癌侵袭镜像痛模型小鼠镇痛作用及其中枢机制探析 　　[摘要] 该研究旨在了解CQ复方对癌侵袭镜像痛（cancer invasion induced mirror image pain，CIIMIP）模型小鼠的?痛作用及其相关中枢机制。将雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、操作对照组（注射0.2 mL灭活的S180肉瘤细胞液）、模型组（于右腿股骨大转子处注射0.2 mL S180肉瘤细胞液）、CQ复方低剂量组（模型+100 mgkg-1，ip）、CQ复方中剂量组（模型+150 mgkg-1，ip）、CQ复方高剂量组（模型+200 mgkg-1，ip），造模前及术后用Von Frey纤维丝测定镜像侧后足的机械缩足阈值（mechanical withdrawal threshold，MWT）；采用高效液相-荧光法（HPLC-FLD）检测脊髓L3～L5节段内谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、甘氨酸（Gly）、牛磺酸（Tau）浓度；采用AimPlex流式高通量多因子检测技术检测L3～L5节段脊髓组织内调节激活T细胞表达与分泌因子（RANTES）、单核细胞趋化蛋白（MCP-3）的含量；并观察GABAa受体拮抗剂（荷包牡丹碱）对CQ复方镇痛作用的影响。研究结果发现，CQ复方能够显著提高模型小鼠的MWT（P 　　[Key words] cancer invasion induced mirror image pain； CQ prescription； neurotransmitters； GABAa receptor； proinflammatory cytokine ?R像痛是指当躯体某一部位损伤后，除了损伤部位出现自发性疼痛或痛敏，有时还可导致身体对侧相同区域出现自发性疼痛或痛敏[1]。大量的临床和动物实验研究表明镜像痛是一个非常普遍的现象。在临床上，可观察到复杂区域疼痛综合征患者双侧肢体出现明显的异常疼痛现象[2]。在诸多实验动物模型上，如慢性压迫性损伤模型[3]，脊神经结扎模型[4]，实验性关节炎模型[5]，癌症疼痛模型[6-7]等都发现了镜像痛现象。然而，镜像痛的发生、发展和维持的机制尚不十分清楚，至今治疗效果仍不理想。其中，癌症疼痛出现的镜像痛既严重影响患者的生存质量又干扰癌症的治疗，在临床上是非常棘手的问题 本课题组前期已证实CQ复方对于三叉神经痛模型大鼠具有明显的镇痛作用，且其作用机制与降低高级痛觉中枢纹状体内兴奋性氨基酸Glu的水平有关[8]。另外，也发现脊髓组织内Glu和GABA含量的平衡在癌侵袭镜像痛这种疼痛的传递机制中发挥着重要的作用[7]。因此，本文拟建立小鼠CIIMIP模型，观察CQ复方对模型小鼠MWT的影响；采用高效液相-荧光法、AimPlex流式高通量多因子检测等技术，测定L3～L5节段脊髓组织内Glu，GABA，Gly，Tau，RANTES，MCP-3的含量；研究GABAa受体抑制剂对CQ复方镇痛作用的影响。明确CQ复方对于癌侵袭镜像痛是否同样具有镇痛作用，并进一步深入探讨其可能的镇痛作用机制。为肿瘤侵袭引起的镜像痛的机制研究及临床治疗药物的开发提供参考 1 材料 1.1 动物 SPF级BALB/c雄性小鼠，体重18～20 g，购于中国食品药品检定研究院，许可证号SCXK（京）2014-0013 1.2 瘤株、药品及试剂 S180肉瘤细胞系由中国中医科学院中药研究所惠赠；CQ复方自制，由川芎提取物和青风藤提取物组成，其主要成分盐酸川芎嗪和盐酸青藤碱的质量比例为4∶5。Glu，GABA，Gly，Tau，硼酸，乙酸钠（Sigma公司）；甲醇、四氢呋喃（Fisher Chemicals公司）；邻苯甲醛（Aldrich公司）；β-巯基乙醇（Amresco公司）；荷包牡丹碱（Bicuculline，Bic）（Selleck公司）；Aimplex Muose Custom 8-plex kit多因子检测试剂盒（北京旷博生物技术有限公司） 1.3 仪器 51000-20C Von Frey hairs 疼痛测试包（Danmic公司）；组织研磨仪（IKA，T10 basic ULTRA-TURRAX）；HPLC检测系统（Sykam S-2100，G1321 A荧光检测器，Agilent ZORBAX Eclipse AAA 色谱柱及化学工作站）；NovoCyte D1040 流式细胞仪（艾森生物有限公司）；台式高速离心机（Eppendorf，5417R） 2 方法 2.1 分组、造模、行为学评价及药效观察 将冻存的S180肉瘤细胞注射于健康小鼠腹腔，使其产生癌性腹水，收取后分装冻存。冻存的腹水瘤细胞复苏后，台盼蓝染色计数，调整活细胞数为1×107个/mL，置于冰盒内