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不同品种桑叶总黄酮含量测定 　　摘要 为了适应桑树多元化发展对药食专用品种的需求，采用了分光光度法对贵州省蚕业研究所贵阳桑园基地的60个桑品种桑叶中总黄酮含量进行了测定。结果表明：桑叶总黄酮含量分布在14.765～52.269 mg/g之间，平均含量为27.078 mg/g，品种间差异较大，变异系数为29%。其中道真桑、特优2号、川-16总黄酮含量高，生长优势明显，因而具有较高的药食用途开发利用价值 关键词 桑叶；品?N；总黄酮；紫外分光光度法 中图分类号 R284 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）03-0223-01 长期以来，栽植桑树主要被用来养蚕，随着经济的不断发展，这种单纯的栽桑养蚕形式已不符合农业多元化发展趋势，随着科研人员对桑树研究的深入，桑叶的营养价值和药用价值已越来越引起人们的关注，黄酮类物质是桑叶发挥功效的主要活性成分之一，具有多种生物学功能[1-4]。桑树产品属于药食两用食品，但药食专用桑品种资源的缺乏严重制约了其开发和利用。因此，该试验对不同桑品种总黄酮含量进行测定，旨在筛选出具有较高药食开发价值的桑品种 1 材料与方法 1.1 试验材料、仪器与试剂 1.1.1 材料。桑叶采于贵州省农科院蚕业研究所贵阳桑园基地，采集时间为2016年7月19―25日，采摘部位为桑树中部枝条叶片。采摘的桑叶用自来水冲洗，除去泥沙等杂物，再用双蒸水冲洗干净，风干后置于恒温鼓风干燥箱中，105 ℃杀青 5 min，然后在60 ℃恒温箱中烘至恒重，粉碎，过60 目筛，干燥桑叶粉分别装入密封袋备用 1.1.2 仪器。鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；JH电子精密天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；多功能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；紫外/可见分光光度计（上海元析仪器有限公司） 1.1.3 试剂。芦丁标准品（成都曼思特生物科技有限公司、中国科学院成都生物研究所共同研制）；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇均为分析纯试剂 1.2 试验方法 1.2.1 标准曲线的绘制。准确称取芦丁标准品10.40 mg（120 ℃烘至恒重），置于50 mL容量瓶中，用50%乙醇溶解、定容，配制成芦丁标准溶液。分别准确吸取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，分别加入5%的NaNO2溶液0.5 mL摇匀，放置5 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.5 mL，再过5 min后再加入4 mL 4%NaOH溶液，混匀，用50%乙醇稀释至刻度。放置15 min，在510 nm下测定吸光度，以第一管溶液作为空白。以芦丁浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线[5] 1.2.2 桑叶中总黄酮的提取。精密称取桑叶粉1.000 g于100 mL锥形瓶中，加体积分数70%乙醇40 mL，在60 ℃条件下以420 W功率超声波提取40 min，过滤，将滤液转移至100 mL容量瓶，滤瓶用70%的乙醇洗涤3～5次，加70%乙醇定容至刻度，振荡摇匀为待测样品液[6] 1.2.3 桑叶中总黄酮含量的测定。准确吸取待测样品液1 mL，放入10 mL容量瓶中，分别加入5%的NaNO2溶液0.5 mL摇匀，放置 5 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.5 mL，再过5 min后再加入4 mL的4% NaOH溶液，混匀，用50%乙醇稀释至刻度。放置15 min，在510 nm下测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮含量 总黄酮含量（mg/g）=■（1） 式（1）中，Y是吸光度值，V1是样品提取液定容体积（mL），V2是测定吸光度用样液的定容体积（mL），V3测定吸光度用样液的体积（mL），M 是样品质量（g） 2 结果与分析 2.1 芦丁标准曲线和方程 以溶液质量浓度为X轴，吸光度为Y轴，制作标准曲线并得回归方程与回归系数（图1）。回归方程为Y=11.787X-0.003 1，计算得到回归系数R2=0.999 4 2.2 不同品种对桑叶总黄酮含量变化的影响 不同品种桑叶分别经烘干、超声提取后，测得总黄酮含量见表1。60个品种的平均总黄酮含量为27.078 mg/g，品种间差异较大，变异系数为29%。其中，道真桑总黄酮含量最高，为52.269 mg/g，强桑1号总黄酮含量最低，仅为14.765 mg/g，其差异达3倍以上 3 结论与讨论 植物中提取的黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗氧化、抗病原微生物、改善免疫功能、防治心血管疾病、改善繁殖性能、抗炎等作用[7]。桑树是黄酮类物质含量较高的树种之一，但其含量受桑品种、生长环境、桑叶部位等影响。在桑树药食开发过程