丹参酮ⅡA对心肌缺血再灌注损伤大鼠氧化应激保护作用.doc

丹参酮ⅡA对心肌缺血再灌注损伤大鼠氧化应激保护作用A），羟胺法检测超氧化物歧化酶（SOD），可见光法检测过氧化氢酶（CAT），比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）；Western bolt法检测心肌组织Nrf-2、HO-1蛋白的表达水平。 结果 丹参酮ⅡA 30 mg/kg和辛伐他汀50 mg/kg均能显著增加MIRI大鼠血清和心肌组织中SOD、CAT和GSH-Px活力（P 　　[Key words] TanshinoneⅡA；Myocardialischemia reperfusion injury；Oxidative stress 心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI）是指缺血的心肌在恢复供血后，不仅功能未得到恢复，反而损伤加重，出现心律失常、梗死面积扩大、舒缩功能降低等现象[1]。MIRI发生机制复杂，其中由于再灌注引起的氧自由基大量积累所导致的氧化应激损伤是重要的机制之一[2]。MIRI是临床缺血性心脏病治疗过程中的难题[3]，目前仍没有较好的防治方法 中药防治冠心病有独特的疗效[4-5]。丹参（Salvia？鄄miltorrhiza Bge.）为唇形科多年生草本植物，以根入药，具有活血化淤、通经止痛、清心除烦等功效[6]，临床广泛用于心脑血管疾病的治疗。丹参酮（tanshinone）为丹参的有效活性组分，其中丹参酮ⅡA为丹参酮中含量最高的活性成分[7]，在心血管疾病以及抗炎、抗肿瘤等方面有较好效果[8-11]。本研究采用大鼠冠状动脉左前降支结扎[12]所造成的急性心肌梗死模型，以丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px），和Nrf-2、HO-1蛋白表达水平为考察指标[13-14]，探讨丹参酮ⅡA对MIRI氧化应激的作用，以期为冠心病的临床治疗提供实验参考 1 材料与方法 1.1试验动物 健康雄性SD大鼠，体重260～280 g（2月龄），无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物质量合格证号为SCXK（京）2012-0001。动物到达之后，在SPF级动物房适应性饲养1周，饲养条件为室温18～25℃，环境相对湿度为50%～80%，自由饮食饮水，每组均给予正常饲料喂养 1.2 药物及试剂 丹参酮ⅡA磺酸钠注射液（上海第一生化药业有限公司。辛伐他汀片（美国默沙东公司，M013303）。戊巴比妥钠（Sigma公司，P3761）。羧甲基纤维素钠（Amresco公司，BS0308）。MDA（批号、SOD（批号、CAT（批号和GSH-Px（批号试剂盒购于南京建成生物工程研究所。Tissue Protein Extraction Kit（批号：01434/40116）、BCA Protein Assay Kit（批号：30134）、SDSGel Kit（批号：20118）和eECL Western Blot Kit（批号均购自北京康为世纪生物科技有限公司。Nrf2、HO-1、β-actin抗体均购自Santa Cruz公司；HRP标记的二抗购自中杉生物有限公司 1.3 仪器 电子天平（AL104-IC型，Mettler Toledo公司）。多导（16道）生理记录仪（MP150型，BIOPAC公司）。小动物呼吸机（ALS-V8S型，上海奥尔科特生物科技有限公司）。酶标仪（Tecan Infinite M1000 PRO型，Tecan公司）。离心机（L550型，湘仪离心机仪器有限公司）。Bio-rad ChemiDoc XRS+ System，（Bio-Rad公司） 1.4 动物分组及给药 采用随机数表法将40只雄性SD大鼠随机分为四组，每组10只，分别为假手术组、模型组、丹参酮ⅡA 30 mg/kg组、辛伐他汀50 mg/kg组。MIRI前连续给药7d，丹参酮ⅡA腹腔注射给药，辛伐他汀灌胃给药，假手术组和MIRI模型组大鼠则灌胃和腹腔注射等量体积的生理盐水 1.5 大鼠心肌缺血再灌注模型制备 3%戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，经口气管插管，连接呼吸机，仰卧固定，记录心电。左胸部脱毛，消毒，于3～4肋间切皮钝性分离开胸。在肺动脉圆锥左侧与左心耳交界下缘2～3 mm处，以6-0无创缝合针丝线，进